抗HepG2和Hela细胞活性物质及其作用机制的研究

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1、西南交通大学硕士研究生学位论文第I页摘要目的：用CCK-8法对部分从植物中分离获得的样品进行抗人肝癌HepG2细胞和宫颈癌Hela细胞活性筛选，然后对其中有活性样品的抗肿瘤作用机制进行初步的探究，从而对抗肿瘤药物的研发奠定基础。方法：通过CCK-8法检测不同浓度5-FU对HepG2细胞、Hela细胞的抑制作用，获得最佳作用浓度。用此浓度的5-FU做阳性对照，对部分来自植物的样品进行抗HepG2细胞、Hela细胞的活性筛选；用33342/PI双染试剂盒检测具有抑制作用的澳洲茄碱、澳洲茄胺、澳洲茄边碱、客西茄碱对HepG2细胞和Hela细胞作用后的凋亡情况；采用实时荧光定量PCR对Hela细胞和H

2、epG2细胞中相关凋亡基因Bcl-2、Bax的表达进行检测。结果：HepG2细胞和Hela细胞在5-FU的浓度为50μg/mL时抑制率分别为86.38±3.410、75.77±3.047。野百合碱，光萼野百合碱对HepG2细胞和Hela细胞没有明显抑制作用。澳洲茄碱、澳洲茄胺、澳洲茄边碱、客西茄碱对HepG2细胞和Hela细胞具有较高抑制活性。它们对HepG2细胞的IC50分别为17.70μg/mL、24.05μg/mL、19.89μg/mL、20.32μg/mL；对Hela细胞的IC50分别为26.18μg/mL、22.50μg/mL、22.44μg/mL、26.31μg/mL。用Hoech

3、st33342/PI双染试剂盒来检测经过加入不同浓度的澳洲茄碱、澳洲茄胺、澳洲茄边碱、客西茄碱后，人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌Hela细胞发生了细胞凋亡。采用实时荧光定量PCR对Hela细胞和HepG2细胞中相关凋亡基因Bcl-2、Bax的表达进行检测，在HepG2细胞中，阳性组、澳洲茄碱组、澳洲茄胺组、澳洲茄边碱组、客西茄碱组下调Bc1-2、上调Bax。在Hela细胞中，阳性组、澳洲茄碱组、澳洲茄胺组、澳洲茄边碱组下调Bc1-2；阳性组、澳洲茄碱组、客西茄碱组上调Bax。结论：野百合碱，光萼野百合碱不能抑制人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长；澳洲茄碱、澳洲茄胺、澳洲茄边碱、客

4、西茄碱均能明显抑制人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长，且与浓度成一定关系；澳洲茄碱、澳洲茄胺、澳洲茄边碱、客西茄碱均能诱导人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌Hela细胞发生凋亡；通过对细胞凋亡基因Bax与Bcl-2的检测，证明澳洲茄碱、澳洲茄胺、澳洲茄边碱、客西茄碱可能是通过下调Bc1-2、上调Bax诱导HepG2细胞凋亡；澳洲茄碱、澳洲茄胺、澳洲茄边碱可能是通过下调Bc1-2诱导Hela细胞凋亡；澳洲茄碱、客西茄碱可能是通过上调Bax诱导Hela细西南交通大学硕士研究生学位论文第II页胞凋亡。关键词：CCK-8；细胞凋亡；Hoechst33342/PI双染；实时荧光定量。西南交通大

5、学硕士研究生学位论文第III页AbstractObjectiveTheCCK-8methodwasusedtoscreentheanti-humanhepatomaHepG2cellsandHelacellsofcervicalcancersamplesobtainedfromthesamplesisolatedfromplants,andthentheanti-tumormechanismofactivesampleswaspreliminaryexploredtodevelopantitumordrugsandlaythefoundation.MethodsDeterminedbyCCK-

6、8assaytodetectdifferentconcentrations5-FUroleofhumanhepatomaHepG2cellsandhumancervicalcarcinomaHelacells,andgetthebestconcentrationofaction.Usingthisconcentrationof5-FUasapositivecontrol,theactivityofanti-humanhepatomaHepG2cellsandhumancervicalcancerHelacellswasscreenedforsomesamplesfromplants;Apopt

7、osisofHepG2cellsandHelacellswastestedbyusing33342/PIdoublestainingkittodetecttheeffectsofSolasonine,Solasodine,SolamargineandKhasianineonHepG2cellsandHelacells.Real-timequantitativePCRwasusedtodetectt