华蟾素对正常人外周血来源树突状细胞的影响.doc

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1、华蟾素对正常人外周血来源树突状细胞的影响【摘要】目的：从树突状细胞(DCs)的分子细胞水平初步探讨华蟾素提高机体免疫力的作用机制。方法：分离正常人外周血单核细胞，以GM-CSF+IL-4培养诱导DCs，采用自身配对设计分成对照组和华蟾素组（DCs培养48小时后加入华蟾素）。培养第7天镜下观察两组细胞形态的异同，用流式细胞仪检测DCs表面分子的表达水平，用CCK8检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力，用ELISA法检测DCs培养液上清中IL-12的水平。结果：华蟾素组DCs与对照组比较细胞形态相对成熟，表面分子表达水平增高，刺激同

2、种异体淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌能力增强。结论：华蟾素能增强正常人DCs的功能。【关键词】树突状细胞华蟾素外周血流式细胞仪酶联免疫吸附试验[Abstract]Objective:TostudytheeffectofCinobufotalinonthemorphous，phenotypeandfunctionofdendriticcellsderivedfromperipheralbloodofhealthadults,andtoexplainthemechanismofactionofCinobufotalinfromthem

3、oleculeandcelllevelsofDCs.Methods:Mononuclearcellsofhealthyadultswereisolatedfromperipheralblood,andwereculturedtoinduceDCswiththecombinationofGM-CSFandIL-4.Usingselfmatched-pairsdesigntwogroupsweredividedintheexperiment:controlsandCinobufotalin（Cinobufotalinwasaddedto

4、theculturemediaafterthecellshadbeenincubatedfor48hours）.Onthe7thday,DCsof2groupswereobservedtocomparethedifferencesofthemorphous,theexpressionofsurfacemoleculesonDCsweredetectedbyflowcytometer;theDCs’capacitiesofstimulatingallogeneiclymphocyteproliferationwasdetectedby

5、cellcountkit8(CCK8),andtheconcentrationofIL-12inthesupernatantsofDCs’cultureswasdetectedbyELISA.Results:comparedwiththecontrols,theDCsincubatedwithCinobufotalinhadmorematurestate,hadhigherexpressionofsurfacemolecules,andhighercapacitiesofstimulatingallogeneiclymphocyte

6、proliferationandsecretingIL-12.Conclusion:CinobufotalincanenhancethefunctionofDCsofhealthyadults.[Keywords]Dendriticcell;Cinobufotalin；Peripheralblood；Flowcytometer；Enzyme-linkedimmunosorbentassay华蟾素(cinobufotalin)是由中华大蟾蜍阴干的全皮为原料提取的水溶性制剂，应用于临床治疗乙肝及肝癌已有20多年的历史。临床应用表明其能显

7、著提高机体的免疫功能[1，2]。但有关华蟾素作用机制的研究很少，本课题通过研究华蟾素对正常人外周血来源的树突状细胞(DCs4)形态、表型和功能的影响，从DCs的分子细胞水平初步探讨华蟾素提高机体免疫功能的作用机制。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞因子和单克隆抗体rhGM-CSF(北京宝赛生物技术有限公司)、rhIL-4(R&DSystems,Inc)、rhIL-2(南京军事医学科学院)、FITC-CD80鼠抗人单克隆抗体(BioLegend)、PE-CD86、FITC-CD40鼠抗人单克隆抗体(晶美生物工程有限公司)、P

8、E-HLA-DR鼠抗人单克隆抗体、PE和FITC鼠IgG(CALTAGLABORATORIES)。1.1.2主要试剂RPMI-1640(Sigma公司)、小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司)、淋巴细胞分离液(上海恒信化学试剂有限公司