染色体制备经验手册

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1、人类染色体标本制备经验手册目录第一部分人类染色体研究的实验室建设………………1页第二部分各类器械清洗与常用试剂配置………………4页第三部分人类染色体标本制备方法……………………11页第四部分探讨染色体标本制备技术中的若干问题……22页第五部分附录……………………………………………25页第一部分人类染色体研究的实验室建设一、实验室要求1、准备室（约30平方米）：供清洗玻璃仪器、配制试剂仪器包装消毒及制片场所，还必需配置耐酸碱水池、实验操作台、药橱等设施。并能合理放置冰箱、电热干燥箱、离心机、纯水器、消毒锅、天平等仪器，以方便使用。2

2、、无菌室（约25平方米）：用作细胞的接种培养、配备培养基。分为更衣室（约4平方米）、缓冲室（约6平方米）、接种室（约15平方米）。配备空调机、传递窗、离心机、倒置显微镜、超净工作台、臭氧发生器或紫外灯、培养箱等设备仪器。3、分析室（约15平方米）：为观察分析核型、整理资料场所。配备高清晰度带照相装置的显微镜，电脑、打印机、办公桌等。二、设备仪器（一）仪器1、超净工作台一台2、光学显微镜二台（可以安装染色体软件分析系统）倒置显微镜与带照相装置的正立显微镜各一台。倒置显微镜用作细胞培养；正立显微镜用作核型分析，有条件的单位可配备染色体

3、分析软件、电脑、打印机等。3、隔水式恒温培养箱一台开展产前检查的单位，最好购买二氧化碳培养箱。4、电热干燥箱一台5、冰箱二台：普通冰箱和低温冰箱各一台6、酸度计一台（可略）7、纯水器（电阻率18兆欧姆）一台；（可略）8、高压灭菌锅一台（可略）9、电热磁力搅拌器一台（可略）10、真空泵（无油）一台（可略）11、电子天平二台（万分之一天平与普通天平各一台）12、水平式离心机二台转速0-4000转/分，10毫升/管，大容量与小容量各一台。大容量的供制片用，小容量的放置无菌室供细胞培养用。13、可调移液器若干支：规格从5-5000微升若干

4、支14、超声波清洗器一台（可略）15、水浴箱（0-100℃可调）（二）玻璃器皿与耗材1、培养瓶：15毫升链霉素瓶，25毫升小方瓶（建议采用一次性培养瓶）。2、刻度离心管（10毫升）50支3、量筒（10-1000毫升）：各种规格各一个。4、不锈钢滤器（各种规格各一个）及滤膜（孔径中0.25微米）一盒5、注射器（1-20毫升）若干6、盐水瓶（100-500毫升）若干7、试剂瓶（磨口）10个8、蒸馏水瓶（3万或5万毫升）2个9、染色缸1个10、研钵1个11、酒精灯2盏12、滴管（带吸头）50支13、载玻片若干14、试管架和离心管架各2个

5、15、各种镊子与剪刀若干16、铝饭盒（供盛培养瓶滴管等器械消毒时使用）17、烧杯（容量50-2000毫升）各一个18、抽滤瓶（1000-2000毫升）一个19、各种规格的可调移液器吸头若干20、载波片盒（50-100片）若干*玻璃器材的材质应采用中性硬质玻璃或硼硅玻璃三、常用药品及试剂1、培养基（RPMI1640、HamF10）2、植物凝集素（phytohemagglutinin简称PHA）3、肝素钠（抗凝剂，医用级）4、血清（小牛血清、胎牛血清）5、抗菌素（青霉素、链霉素）医用级6、秋水仙素（秋水仙碱）7、氧化钾（分析纯）8、碳

6、酸氢钠（分析纯）9、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠（分析纯）10、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，分析纯）11、三羧甲基氨基甲烷（Tris，分析纯）12、胰蛋白酶13、酚红14、姬姆沙染料（Giemsa）15、甲醇（分析纯）16、冰醋酸（冰乙酸）（分析纯）17、重酪酸钾（化学纯）18、浓硫酸（工业级）19、香柏油20、甘油（分析纯）21、乙醇（无水和纯度95%，化学纯）22、乙醚（无水，化学纯）23、生长因子（碱性成纤维细胞因子bFGF、表皮细胞生长因子EGF）24、氢氧化钠（分析纯）25、柠檬酸钠（分析纯）（注：达晖生物全套提供上述仪器和试

7、剂产品，并提供完善的技术支持和服务）第二部分各类器械清洗与常用试剂配置一、各类器械清洗处理1、清洗液配置清洗液配方配方试剂12345重鉻酸钾（克）606080100200工业硫酸（毫升）90460100800500水（毫升）7503001000200500方法：先将重酪酸钾溶于水中，再慢慢加入工业浓硫酸。注意：配制时会产生高热，应采用耐高温材料配制。配制人员要做好防护措施（如配带保护眼镜、耐酸手套等）贮存清洗液的容器一定要带盖子，防止清洗液不断吸收空气的水分，而变质失效。容器的材质可选用陶瓷或耐酸硬塑。*配制时切记不能将水倒入硫酸

8、里！配方3较为广泛使用。2、玻璃器皿清洗新的玻璃器皿先用清水冲干净，再在清洁剂（如洗衣粉、洗洁精等）溶液中，用毛刷彻底刷干净，然后清水冲净。晾干（如有超声波清洗器，可将器皿用清水冲净后放入超声波清洗器中清洗后，清水冲净晾干）。再用5-10%HCL（