流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选ckit+肝癌细胞的比.doc

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1、流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选ckit+肝癌细胞的比【摘要】目的比较流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选肝癌亚群细胞的效果。方法原代培养肝细胞癌细胞，分别以流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选ckit+肝癌细胞，然后使用流式细胞仪鉴定细胞纯度，计算回收率；以台盼蓝检测细胞活力，CCK8法检测细胞增殖能力，裸鼠移植测其成瘤率，并进行统计学分析。结果流式细胞仪分选所得到的ckit+肝癌细胞纯度、回收率最高，与其他两种方法分选所得细胞的相应指标比较，差异有统计学意义(P<0.05)；3种方法所得细胞之间

2、的细胞活力、刺激指数、移植成瘤率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分选前后的细胞之间活力、刺激指数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞仪分离法是分离肝癌亚群细胞的较佳方法。【关键词】流式细胞仪；免疫磁珠；亲和板结合分离法【Abstract】ObjectiveTocomparetheeffectofthreemethodsincludingflowcytometrysorting,magneticcellsortingandimmunepanningisolationinisolatingsu

3、b-populationinhepatomacarcinomacells.Methodsckitpositivecellsinprimarilyculturedhumanhepatomacarcinomacellswereseparatedwithflowcytometrysorting,magneticcellsortingandimmunepanningisolation,respectively.Thepurity,viabililty,cellproliferationandtheratiooftumorigenesisa

4、ftertransplantationofthehepatomacarcinomacellsweredeterminedwithflowcytometry,trypanblueexclusion,CCK8assayandallogeneicgrafttonudemouserespectively.Then,thedatawerecomparedstatistically.ResultsThepurityandrecoveryrateoftheckitpositivecellsisolatedwithflowcytometryso

5、rtingweresignificantlyhigherthanthosewiththeothertwomethods,withstatisticaldifference(P<0.05).Therewasnosignificantdifferenceuponviablilty,stimulationindexandtumorigenesisaftertransplantationamongthecellsisolatedwiththethreemethods(P>0.05).Therewasnosignificantdif

6、ferenceuponviabilityandproliferationbetweenthecellsbeforeandafterseparatingbyflowcytometrysorting(P>0.05).ConclusionsFlowcytometrysortingisaneffectiveandpracticalmethodforisolatingsubpopulationinhepatomacarcinomacells.【Keywords】Flowcytometry;Magneticcellsorting;Immu

7、nepanningisolation5肿瘤干细胞研究需要获取高纯度、高活力、高增殖能力的肿瘤亚群细胞，并尽量避免混杂细胞、低活力、低增殖能力细胞对细胞亚群特性的干扰。笔者在前期研究的基础上［1］，比较了流式细胞仪分选(flowcytometrysorting，FCMS)、免疫磁珠分选(magneticcellsorting，MACS)及亲和板结合分离法(immunepanningisolation)3种方法分选ckit+肝癌细胞的效果，以期找到一种分离肝癌亚群细胞的较佳方法，为肿瘤干细胞的研究奠定基础。1材料与方法1.1材料1.1.

8、1标本：取材于南方医科大学附属珠江医院2006年4月经手术切除的肝癌标本，经病理证实为原发性肝细胞癌。患者术前未进行任何抗肿瘤治疗，手术后患者4周内存活。1.1.2实验动物：裸小鼠(BALB/c)75只，雌雄兼用，3～5