皮肤真菌检查技术

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1、病原性真菌检验河北省望都皮肤病防治院张维娜真菌（Fungus）具有典型细胞结构（细胞核、细胞器、细胞壁）细胞壁含几丁质和（或）纤维素无根、茎、叶，不含叶绿素以腐生或寄生方式摄取养料能进行有性生殖和（或）无性繁殖第一部分病原性真菌概述对人类致病的真菌分为：浅部真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性，对　　　　　　　治疗有顽固性，但影响身体较小，深部真菌：可侵犯全身内脏，严重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于粮食、饲料、食品中，能产生毒素引起中毒性真菌病。一、生物学性状（一）形态结构真菌细胞结构比细菌复杂细胞壁为几丁质(Chitin)（多

2、聚N－乙酰葡萄糖组成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白质，某些酵母菌还含类脂体。细胞内有较为典型的核结构和细胞器。真菌形态分单细胞和多细胞两类单细胞真菌主要为酵母和类酵母菌（如隐球菌、念珠菌），呈圆形或椭圆形。以出芽方式繁殖。多细胞真菌由菌丝和孢子组成菌丝分枝交织成团，形成菌丝体（Mycelium），并长有各种孢子，这类真菌即一般称为霉菌（Mold）。由于生活环境（如营养、温度、氧气等）的改变，有些真菌的孢子与菌丝两种形态可以互变，这类真菌称为二相性真菌（dimorphicfungus），如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生菌。真菌孢子和细

3、菌芽胞的区别真菌孢子细菌芽胞抵抗力不强，60-70短时间杀死强，煮沸短时间不死数目一条菌丝可产生多个孢子一个细菌体只形成一个芽孢作用为繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在细胞内外形成只在细菌细胞内形成形状形态、色泽多样圆形或椭圆形真菌的形态构成菌丝营养菌丝气生菌丝→生殖菌丝孢子有性孢子由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融合形成绝大多数属于非致病性真菌所具有无性孢子分生孢子分生孢子梗的顶端或侧面大分生孢子小孢子菌属、表皮癣菌属小分生孢子毛癣菌属叶状孢子菌丝细胞直接形成芽生孢子隐球菌、念珠菌关节孢子厚膜孢子新型隐球菌子囊孢子菌丝末端形

4、成膨大的囊状结构即孢子囊，内含很多孢子根霉菌真菌菌丝形态真菌孢子形态（二）培养特性大多数真菌营养要求不高，常用沙保氏培养基（SDA）培养。浅部病原性真菌的最适温度为22～28℃，生长缓慢，大多于1～4周出现典型菌落。深部病原性真菌培养在37℃中生长最好，生长较快，经3-4天即长出菌落。真菌菌落类型类型定义特征颜色举例酵母型菌落为单细胞真菌的菌落，形态与一般细菌菌落相似，以出芽形式繁殖光滑、湿润，一般为乳白色新型隐珠菌类酵母型菌落外观似酵母菌落，但可见伸入培养基中的假菌丝，由伸长的芽生孢子形成光滑、湿润，一般为乳白色白色念珠菌丝状

5、菌落为多细胞真菌的菌落，由许多管状、分枝菌丝体组成绒毛状、絮状、粉末状、颗粒状、石膏状。可产生各种色素。毛癣菌（三）变异性真菌易发生变异，在人工培养基中多次传代或孵育过久，可出现形态结构、菌落性状、色素及毒力等改变。（四）抵抗力真菌对干燥、阳光、紫外线及一般化学消毒剂有一定的耐受力，但充分暴露于阳光，紫外线及干燥情况下大多数真菌可被杀死，且对2.5%碘酒，10%福尔马林都敏感，一般可用福尔马林薰蒸被真菌感染的房间。对热敏感，一般60℃1小时可杀死真菌菌丝和孢子。二、致病性与免疫性（一）致病性真菌引起的疾病大致包括真菌性感染：主要

6、是外源性感染浅部真菌侵犯皮肤、指甲及须发等组织，顽强繁殖，发生机械刺激损害，同时产生酶及酸等代谢产物，引起炎症反应和细胞病变。深部真菌侵犯皮下，内脏及脑膜等处，引起慢性肉芽肿及坏死。2．条件致病性真菌感染：主要是内源性感染（如白色念珠菌），亦有外源性感染（如曲霉菌）。3．过敏性真菌病：由真菌性过敏原（如孢子抗原）引起过敏症，如哮喘，变态反应性肺泡炎和癣菌疹等。4．真菌毒素中毒症：侵犯害肝、肾、脑、中枢神经系统及造血组织。如黄曲霉毒素、某些镰刀菌素和黑葡萄穗素。（二）免疫性1．非特异性免疫：人类对真菌感染有天然免疫力。皮肤分泌短链

7、脂肪酸和乳酸、血液中转铁蛋白、中性粒细胞和单核巨噬细胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。2．特异性免疫：真菌感染中细胞免疫是机体排菌杀菌及复原的关键，T细胞分泌的淋巴因子、以T细胞为主导的迟发型变态反应引起免疫病理损伤能局限和消灭真菌，以终止感染。三、微生物学诊断（一）直接检查1．不染色标本的直接镜检：直接采取标本制片、显微镜下直接观察，若发现真菌菌丝或孢子存在时，即可初步判定为真菌感染。1）标本制备：2）检查方法：3）封固液：①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。②墨汁：主要用于检查有荚膜的

8、真菌（如新型隐球菌等）。③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。2．染色标本检查：1）革兰氏染色：各种真菌均为革兰氏阳性，为深蓝色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子丝菌、诺卡