雷公藤多苷片高效液相指纹图谱的研究

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1、雷公藤多苷片高效液相指纹图谱的研究杨春欣，梁健，沈熊，吕迁州（复旦大学附属中山医院药剂科药学研究室，上海200032）摘要：目的雷公藤多苷片有抗炎及抑制细胞免疫和体液免疫等作用，是治疗类风湿性关节炎、肾病综合征、皮肤病等自身免疫性疾病的药物。目前雷公藤多苷片质量控制标准还不太完善，建立雷公藤多苷片的高效液相指纹图谱,为全面而有效地控制雷公藤多苷片的质量，对临床用药的有效性和安全性有很大的意义。方法取不同生产厂家的雷公藤多苷片，采用高效液相色谱法，色谱柱为DiomonislC18分析柱，检测波长为218nm

2、，柱温为35℃，以水-乙腈为流动相，1.0mL·min-1的流速,梯度冼脱。结果获得雷公藤多苷片的指纹图谱。其指纹图谱的方法有较好的重现性、精密度和稳定性。不同样品的高效液相指纹图谱的主要峰基本一致，提示不同厂家及批号的雷公藤多苷片的主要成分基本相同，但含量有所不同。确定了18个峰为雷公藤多苷片的共有峰，初步建立了雷公藤多苷片的HPLC指纹图谱，为衡量其质量优劣提供了依据。结论利用雷公藤多苷片HPLC指纹图谱可以较好地反映雷公藤多苷片的内在质量，且该方法简便，快速，有效，灵敏，有助于雷公藤多苷片的质量控制

3、。关键词：高效液相色谱法，指纹图谱，雷公藤多苷片，雷公藤内酯醇雷公藤多苷片是卫矛科（Celastraceae）雷公藤属雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook.f.)的干燥去皮根经提取、纯化后得到的有效组分。雷公藤多苷片与其它雷公藤制剂相比具有用量小,不良反应少等优点[1]，雷公藤多苷片广泛应用于治疗类风湿性关节炎、肾病综合征、白塞氏三联征、麻风、自身免疫性肝炎及皮肤病等疾病，疗效显著，其生理活性是由二萜内酯、生物碱、三萜等多种成分协同产生[2]。雷公藤多苷片是目前临床上使用较多的非甾体

4、类免疫抑制剂。目前国内雷公藤多苷片至今还没有很完善的质量控制标准,仅对雷公藤内酯醇或雷公藤内酯甲进行控制[3,4,5]，以至不同厂家的产品存在不同程度的差异，为了准确地控制雷公藤多苷片中有效成分群的含量，建立雷公藤多苷片的指纹图谱[6]，对其临床用药的有效性和安全性有很大的意义。1仪器与材料Gillson　高效液相色谱仪系统，包括：306型泵，119紫外/可见光检测器，715色谱处理系统，Rheodyne9125型进样阀，配以20μL采样环，805测压仪，811C动态混合器，Gilson818柱温箱。EY

5、ELA旋转蒸发仪N1001型（日本东京理化器械株式会社）。B2500S-MTH型超声波清洗仪（上海必能信超声有限公司）。AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。雷公藤多苷片A～H共8个批号（上海复旦复华制药厂和江苏泰州美通制药厂）；雷公藤内酯醇对照品,含量99.53%,雷公藤内酯甲，含量99.17%，均购自上7海科卫医疗技术研究所。中性氧化铝，上海五四化学试剂厂生产；微孔滤膜，孔径0.45μm，上海半岛实业有限公司净化器材厂生产。乙酸乙酯,分析纯;乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；自制纯水；

6、其他溶剂均为分析纯。2方法与结果2.1供试品溶液的制备：采用均匀取样法从雷公藤多苷片取出15片，研细成粉，精密称取400mg，置于25mL三角烧瓶中，加入20mL乙酸乙酯，超声提取30min，过滤，滤液过15g中性氧化铝柱，用30mL乙酸乙酯洗脱，收集全部过柱后的洗脱液，回收乙酸乙酯，得残存物，加1.5mL乙腈溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，备用。2.2雷公藤内酯醇对照品溶液的制备：精密称取干燥恒重的雷公藤内酯醇对照品0.00081g，用乙腈溶解并定容在10mL容量瓶中，制成浓度为0.081mg·mL-1

7、对照品溶液，备用。2.3色谱条件：色谱柱:Dikma公司DiamonislC18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相:水（A）-乙腈（B），梯度洗脱：0～70min，A：65%～0%，B：35%～100%；流速:1.0mL·min-1，检测波长:218nm；柱温:35℃；进样体积:20μL。2.4指纹图谱方法学建立与考察2.4.1检测波长的比较：本实验选择了210，215，218，219，225nm五个波长进行测定，结果在波长218nm下出现的色谱峰数目适中，内参物雷公藤内酯醇的色谱峰完整，且基线平

8、稳，故选择218nm作为雷公藤多苷片HPLC指纹图谱的检测波长。2.4.2不同流动相及洗脱方法的比较：采用乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸等不同流动相进行等度或梯度洗脱，结果发现含有磷酸的流动相并不能改变峰型。采用梯度洗脱,可兼得二者的优点。见表1。表1梯度洗脱方案方案时间(min)乙腈(%)水(%)11→1515→403535→1006565→020→4040→10060→030→6040→10060→040→3030→6060