动物细胞培养技术陈婷婷

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1、细胞培养技术与方法课程论文学院家蚕基因组生物学国家重点实验室专业微生物学级别2014级姓名陈婷婷学号112014408002214类别全日制硕士主讲教师潘敏惠2015年7月动物细胞培养技术与应用（姓名：陈婷婷学号：112014408002214院系：家蚕基因组生物学国家重点实验室）摘要：细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术，已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法。文章对细胞培养技术的应用作一综述。关键词：细胞培养；应用；

2、研究进展细胞是构成机体的基本单位，是生命活动的基本单位。一切有机体（除病毒）都是由细胞组成的。细胞具有独立的、有序的自控代谢体系。因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、征服疾病的关键。细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术。细胞培养技术的优点是可以直接观察活细胞的形态结构、生命活动及其变化；提供大量生物性状相似的试验对象，特别是研究大型动物（奶牛）时具有耗资少的优点。但模拟体内环境仍与实际有很大的差异，因此利用细胞培养技术的试验

3、结果不可以轻易做出与体内等同的结论。动物组织（细胞）培养开始于20世纪初，现已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法[1]。随着细胞培养技术的不断发展，现在也广泛应用于动物生产研究。20世纪60年代，该技术应用于水产动物的病毒分离和纯化，对于鱼类疾病的防治具有重要作用。近年来研究发现单一种子细胞难以完成构建复杂组织的需要，因此产生了联合培养细胞技术。联合培养下的细胞之间存在着精细的相互调控关系，因而更符合仿生学的原理且更有利于种子细胞的增殖与分化，为复杂的细胞诱导分化以及体外组织构建提供了新思路、新方法[2]。1细胞培养技术细

4、胞培养是将活体组织或细胞从试验动物体内取出，放在模拟体内生存环境的体外环境（无菌、适温、营养丰富）中，使高体细胞生长、发育的一种方法。按照培养的结构成分不同，将其分为组织培养、细胞培养及器官培养等。根据细胞是否在支持物上生长，将其分为贴壁型和悬浮型。一般来说，圆形细胞如淋巴细胞属于悬浮型，而胞体梭型（成纤维型细胞）、扁平不规则（上皮型细胞）等属于贴壁型，贴壁型细胞必需贴附在支持物表面生长。细胞培养开始于1906年，Harrison用蛙新鲜淋巴液培养蛙胚神经组织4周，首次成功地利用体外培养液培养神经元，标志着组织细胞的体外培养模式的

5、基本建立。随着细胞培养技术的不断发展和完善，20世纪50年代进入繁盛阶段，细胞培养逐渐被基础研究与应用领域所应用，特别是在医学领域得到迅速的发展。目前，细胞培养技术已经涉及到生物学、农业、环境保护等领域[3]。目前，在细胞培养过程中，只能根据离体细胞的特点和培养条件，提供满足其生长和发育的一些基本生理条件。必须在无菌条件下进行，细胞感染微生物后，会因被夺营养物质而导致细胞生长缓慢或停滞，甚至死亡。需要提供适宜的温度和pH。细胞离体培养技术的关键是细胞培养液的设计，理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的pH、渗透压、营养物

6、质、调节物质的全部需要。细胞培养液中需含有细胞增殖、生长所需要的各种营养物质。如提供能量的物质（N源、C源）、代谢调节控制的物质（无机盐、维生素、激素）。另外，在细胞培养过程中需要提供一定量的气体（O2和CO2）。CO2具有调节pH和缓冲的作用，一般提供5%CO2。动物细胞虽可像微生物细胞一样,在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养,但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比,有显著差别:①动物细胞比微生物细胞大得多,无细胞壁,机械强度低,对剪切力敏感,适应环境能力差;②倍增时间长,生长缓慢,易受微生物污染,培养时须用抗生素;③培

7、养过程需氧量少④培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在;⑤培养细胞一般繁殖50代即退化死亡;⑥代谢产物具有生物活性,生产成本高,但附加值也高。微生物和动物细胞培养的差别微生物（细菌）动物细胞细胞直径（µm）1～1010～100营养谱比较广泛的基质要求严格倍增时间（h）0.5～212～60pH控制±0.5±0.05温度控制（℃）±1±0.251.1细胞培养所需的条件：（1）培养液以往多用天然培养液，现多用合成培养液。合成培养液有多种，如Eagle氏液、RPMI-1640、MEM和199等，各有其特点和适用范围。Eagle液主要成分为1

8、3种必需氨基酸、8种维生素、糖和无机盐等成分RPMI-1640、199乳汉液还含有其它氨基酸。不同培养液适用于不同细胞，乳汉液多用于鸡胚成纤维细胞培养；Eagle液主要适用于各种二倍体细胞，是最常用的细胞培养液，RPMI-1640、MEM液主要用于