动物细胞培养技术

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1、动物细胞培养技术细胞－生命的基本单位细胞组织器官系统个体1个受精卵婴儿（2万亿个细胞）成人（60万亿细胞）功能单位细胞具有独立的、有序的自控代谢体系，细胞是代谢与功能的基本单位细胞是有机体生长发育的基础细胞是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性没有细胞就没有完整的生命细胞的结构和功能细胞真核细胞原核细胞动物细胞植物细胞真核生物真菌蓝藻细菌原核生物衣原体动植物细胞显微结构动物细胞植物细胞细胞膜细胞质细胞核细胞壁叶绿体液泡比较动植物细胞亚显微结构动物细胞植物细胞细胞膜细胞核线粒体内质网核糖体高尔基体溶酶体中心体（

2、低等f动物细胞）细胞壁叶绿体液泡的比较最小的如人体的淋巴细胞,仅6μm；血小板仅4μm,细胞的大小各不相同人体内最大的是成熟的卵细胞0.1mm细胞的基本共性1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的生物膜，即细胞膜。2、所有的细胞都有两种核酸，即DNA、RNA，作为遗传信息复制与转录的载体。3、作为蛋白质合成的机器—核糖体，存在于一切细胞内。4、所有细胞的增殖都以“一分为二”的方式进行分裂，遗传物质在分裂前复制加倍，在分裂是均匀地分配到两个子细胞内。1925年：E.B.Wilson:“每个生物科学问

3、题的关键必须在细胞中寻找”细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科目标生命活动细胞整体水平细胞超微结构水平细胞分子水平细胞结构功能对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。研究总体趋势用分子生物学的新概念与新方法，在分子水平上进行研究细胞分子生物学（分子细胞生物学）细胞培养技术研究活细胞组成结构及其生物学功能良好的方法研究基因表达调控和分子生物学的必不可少的研究手段组织学与胚胎学细胞生物学：形态、生理、遗传肿瘤学：特性、发病机制、异种移植微生物学：病毒、细菌免疫学药理学现代医学：细胞培养技术的应用

4、细胞培养的具体应用细胞内活动:DNA转录、蛋白质合成，能量代谢，药物代谢，细胞周期，分化，凋亡细胞物质内流:RNA，激素受体，代谢，钙，信号转导，膜运输环境的相互作用:感染，药物作用，配体受体互作，细胞毒性，突变作用，致癌作用细胞产物:分泌，生物技术，生物反应器设计，产物收获，下游加工遗传学:遗传学分析，转染，感染，转化，免疫，老化细胞-细胞相互作用:形态发生、旁分泌调控，细胞增殖，动力学，代谢协同作用，细胞黏附和运动，机制互作，浸润细胞培养基本概念细胞培养（cellculture)是指从体内组织取出细胞在体外

5、模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。原代培养（primaryculture）：指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。传代（passage）：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。细胞培养的优点1.活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动2.可控制：物理-化学环境PH,温度，渗透压，可溶性气体的控制生理条件激素和营养成分的控制微环境基质，细胞-细胞间互作，气体弥散的调节细胞系均一性可应用选择性培养基、克隆化方法性质确定易用细胞

6、学和免疫染色完成保存液氮中储存真实性和可信性可记录其来源、历史及纯度复制和变异性易定量分析C×t控制可确定剂量、浓度和时间机械化可微量滴定和自动化减少动物的使用药物、化妆品等的细胞毒性实验和筛选3.应用广：学科多：对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类一种动物：不同年龄--不同组织--正常或异常（肿瘤--）4.较经济：可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象细胞培养的局限性范围例举必需的技巧操作污染（化学污染、微生物污染、交叉污染）环境控制工作场所孵箱，PH控制有害生物物质的污染与处置

7、量与成本基本设备消耗品培养基、血清、塑料制品遗传不稳定性异质性、变异性表型不稳定性去分化、适应性、选择性细胞类型的鉴定标志的表达组织学，细胞学几何形状和微环境体外培养细胞的分型（一）贴壁型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞，根据细胞形态，大致分成以下四型：1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。生长

8、特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝、胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。生长特点：易相连成片，相靠—紧密相