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1、PCR的相关技术介绍一、聚合酶链反应的历史回顾1、核酸体外扩增最早的设想由Khorana及其同事于1971年提出：“经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重视该过程便可克隆tRNA基因”。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物，且当时(1970年)Smith等发现了DNA限制性内切酶，使体外克隆基因成为可能，所以，使Khorana等的早期设想被人们遗忘。2、聚合酶链反应的发明1985年，美国PE-Cetus公司的人类遗传研究室Mullis等人才发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(Pol
2、ymeraseChainReaction,PCR),使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件。开始是使用大肠杆菌DNA聚合酶Klenow片段来扩增人基因组中的特异片段。由于该酶不耐热，因此，每次加热变性DNA后都要重新补加Klenow酶。在操作多份标本时，这一过程耗时，费力，且易出错。耐热DNA聚合酶的应用使得PCR反应更易于自动化，继而PE-Cetus公司推出了第一台PCR热循环仪，使该技术的自动化成为现实。Mullis等
3、因此项技术于1993年获得诺贝尔奖金。二、聚合酶链反应相关技术的发展PCR及其相关技术的发展速度是惊人的。国际上分别于1988年和1990年在美国和英国召开了第一届和第二届PCR技术专题研讨会。第一届会议主要讨论了PCR的应用与技术本身的优化问题;第二届会议的主要议题是人类基因组计划与PCR的最新进展。这充分体现了生物学家对PCR的重视。名称主要用途简并引物扩增法扩增未知基因片段巢居PCR提高PCR敏感性、特异性，分析突变复合PCR同时检测多个突变或病原反向PCR扩增已知序列两侧的未知序列，致产物突变单一特异引
4、物PCR扩增未知基因组DNA单侧引物PCR通过已知序列扩增未知cDNA锚定PCR分析具备不同末端的序列locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame增效PCR减少
5、引物二聚体，提高PCR特异性固着PCR有利于产物的分离膜结合PCR去除污染的杂质或PCR产物残留表达盒PCR产生合成或突变蛋白质的DNA片段连接介导PCRDNA甲基化分析、突变和克隆等RACE-PCR扩增cDNA末端定量PCR定量mRNA或染色体基因原位PCR研究表达基因的细胞比例等臆断PCR鉴定细菌或遗传作用通用引物PCR扩增相关基因或检测相关病原信使扩增表型分型(mapping)同时分析少量细胞的mRNA三、其它扩增技术与PCR及其相关技术发展的同时，新的扩增技术也不断诞生。这些技术各有利弊，与PCR互为补
6、充，有的可结合应用，共同构成了核酸体外扩增技术的大家族。我们相信，随着分子生物学技术的发展，这一家族一定会再涌现出新成员。技术应用转录依赖的扩增系统(TAS)检测HIV连接酶链反应(LCR)检测点突变自主序列复制(3SR)系统研究RNA，临床应用、法医学等链替代扩增(SDA)检测、鉴定基因Qβ复制酶系统增加探针检测敏感性循环探针反应增加探针检测敏感性连接酶链反应(A)连接酶链反应(Ligasechainreaction，LCR),是一种新的DNA体外扩增和检测技术,主要用于点突变的研究及靶基因的扩增。是Back
7、man1997年为检出靶基因序列中的点突变而设计发明，并申报了专利。LCR的基本原理为利用DNA连接酶。特异地将双链DNA片段连接,经变性-退火-连接三步骤反复循环,从而使靶基因序列大量扩增。locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewb
8、ayonets,duetomissedfatal,whennightcameLCR的扩增效率与PCR相当，用耐热连接酶做LCR只用两个温度循环，94℃min变性和65℃复性并连接，循环30次左右。其产物的检测也较方便灵敏。目前该方法主要用点突变的研究与检测、微生物病原体的检测及定向诱变等，还可用于单碱基遗传病多态性及单碱基遗传病的产物诊断，微生物的种型鉴定，癌基因的点突变研究等。依赖核
