微生物涂抹法菌落总数检测作业指导

《微生物涂抹法菌落总数检测作业指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、微生物涂抹法菌落总数检测作业指导范围：适用于设备、成品面包装容器、塑料薄膜等的微生物检测、菌落总数的测定。1实验试剂及器材1.1实验试剂1.1.1灭菌生理盐水(0.85％)称取8.5gNaCl溶于1000mL蒸馏水，经121℃灭菌20min后，PH值应为7.0±0.1。1.1.2营养琼脂培养基（平板计数琼脂）：按GB4789.28中4.7规定。1.1.375％乙醇1.2实验仪器1.2.1培养箱：36±1℃1.2.2冰箱：0～4℃1.2.3恒温水浴：46±1℃1.2.4天平1.2.5移液管：1mL，5mL，10mL；1.2.6吸耳球1.2.7广口瓶或三角瓶1.2.8

2、培养皿1.2.9灭菌镊子1.2.10称量纸1.2.11硫酸纸、牛皮纸、线1.2.12脱脂棉球1.2.13高压灭菌锅1.2.14放大镜1.2.15酒精灯2实验步骤2.1准备实验2.1.1将洗净的三角瓶、广口瓶、移液管、镊子、培养皿等一同经180℃，75min灭菌后放入酒精棉球擦拭过的超净台上备用。2.1.2配制一定量0.85％的生理盐水，分装于广口瓶中，每个广口瓶装99mL，并给每个广口瓶装一个大约3×3×3cm3大小的无菌棉球。另配制一定量的营养琼脂培养基（按照营养琼脂培养基外包装标示的浓度配制），与生理盐水一起经121℃，20min（干热121℃，30min）灭

3、菌后，放置于超净台，待用。2.1.3打开超净台及室内紫外灯，灭菌30min，与上面生理盐水和培养基的30min灭菌可以同步进行。2.1.4将灭菌后的生理盐水放置于酒精擦拭后的超净台备用，并将培养基放置于46℃水浴锅中保温。2.2样品采集进行实验前须用酒精棉球擦拭双手及无菌台的台面，然后以无菌镊子取蘸有少量灭菌生理盐水的无菌棉球，以无菌操作方式于无菌操作台内反复擦拭包装膜内表面，接触面积视卫生状况约100～200cm2，然后将擦拭后的棉球迅速装入盛有99mL灭菌生理盐水的瓶中，盖上瓶盖，摇匀待用。此过程均应在燃烧的酒精灯前操作，并且无菌镊子在使用前应在酒精灯的火焰上

4、灼烧后才使用，广口瓶盖应在酒精灯的火焰旁打开。2.3检样稀释及培养2.3.1以无菌操作方式，用1mL灭菌吸管吸取上述稀释液1mL于一个灭菌平皿内，每个样做2～3个平皿。移液管使用前也须在酒精灯火焰上灼烧后方可使用，培养皿打开的幅度应尽量小，且在酒精灯火焰旁打开，用移液管向培养皿注入稀释液的过程，要在酒精灯火焰旁进行。2.3.2稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴或培养箱保温）注入平皿约15～20mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照。2.3.3待琼脂凝后，翻转平板，置3

5、6±1℃温箱内培养48±2h。2.4菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在计下各平板的菌落数后，用同稀释度的各平板菌落总数求出包装膜单位面积的总菌数。2.5菌落计数报告2.5.1样品检测结果表示以“个/m2”报告。2.5.2平板菌落数的选择一个稀释度使用2～3个平板，应采用平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若仅有

6、一条链可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。2.5.3菌落数的报告菌落总数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。3微生物涂抹法菌落总数检测流程图预备实验↓样品采集（涂抹）↓检样↓做成几个适当倍数的稀释液↓选择2～3个适宜稀释度，各以1mL分别加入灭菌平皿内↓每皿加入适量营养琼脂36±1℃↓48±2h菌落计数↓报告