菌落总数测定方法作业指导书

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1、作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期:2012-05-25页数:Page7of7标题：菌落总数测定方法文件修改记录版本修订次数修订日期修订内容002011-02-01A12012-05-25修订分发号:______(仅适用于控制文件)(仅盖有红色印章的文件才有效)编写:审核:批准：作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期:2012-05-25页数:Page7of7标题：菌落总数测定方法1.0目的规定菌落总数的测定方法。2.0范围适用于加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料、流程卫生中菌落总数的检测。3.0术语3.1菌落总数食品检样经过处理，在

2、一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。4.0职责质检部：负责按此方法对加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料、流程卫生中菌落总数进行检测。5.0工作流程图见附录A6.0内容及要求6.1设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6.1.1恒温培养箱：36℃±1℃、55℃±1℃（必要时可选用）6.1.2冰箱：2℃—5℃6.1.3恒温水浴锅：46℃±1℃6.1.4天平：感量0.1g6.1.5pH计6.1.6无菌吸管：1ml（具0.01刻度）、5ml（具0.05刻度）、10ml（具0.1刻度）。6.1

3、.7无菌锥形瓶：容量250ml、500ml编写:审核:批准：作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期:2012-05-25页数:Page7of7标题：菌落总数测定方法6.1.8无菌试管：18×200mm6.1.9无菌培养皿：直径90mm6.1.10放大镜6.2培养基和试剂6.2.1平板计数琼脂培养基。6.2.275%乙醇溶液。6.2.3无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中121℃高压灭菌15min。6.3操作步骤6.3.1样品的稀释6.3.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL生理盐水的无菌均质杯内，8000r/m

4、in～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.3.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。6.3.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.3.1.4按6.3.1.3操作

5、程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。6.3.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。编写:审核:批准：作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期:2012-05-25页数:Page7of7标题：菌落总数测定方法6.3.1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平

6、皿，并转动平皿使其混合均匀。6.3.2培养6.3.2.1待琼脂凝固后将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2或55℃±1℃培养48h±2。6.3.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.3.2.1条件进行培养。6.3.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。6.3.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记

7、录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。6.3.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。6.3.4结果与报告6.3.4.1菌落总数的计算方法6.3.4.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g

8、（mL）样