河南省自然科学基金项目－丝瓜核糖体失活蛋白基因的分离、克隆及表达研究

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1、申报号项目类别A学科名称分子生物学学科代码180.37河南省自然科学基金项目申请书项目名称：丝瓜核糖体失活蛋白基因的分离、克隆及表达研究申请者：所在单位（签章）：主管部门：河南省教育厅联系电话：电子信箱：通讯地址：邮政编码：申请日期：2004年8月20日河南省科学技术厅制1填报说明1、“申请书”用于申请河南省自然科学基金项目，由申请者负责填写。填写前请先查阅有关河南省自然科学基金项目申请办法及规定。申请书各项内容，要逐条认真填写，表达要明确、严谨，实事求是。外来语要同时用原文和中文表达，第一次出现的缩写词，须注明全称。2、封面右上角

2、“申报号”按照河南省科学技术厅分配的编号填写；“项目类别”栏由申请者填写,申请项目属基础研究的此栏为“A”,属应用基础研究的为“B”。“学科名称”及“学科代码”请根据申报项目所属学科，按最新国家标准“学科分类与代码表”，填至三级学科分支。3、基础研究是指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动；应用基础研究是指有广泛应用前景，但以获取新原理、新知识、新方法为主要目的的研究；“项目名称”应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字（包括标点符号）；“申请者”是指申请项目实际主持人。4、在读（含在职）研究生和申

3、请单位的兼职科研人员不得作为申请者提出申请，但可作为项目组成员参加研究。5、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请（含参加）的项目数，连同在研的省级以上科学基金项目数,不得超过两项。同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个项目。6、不具有副高以上专业技术职务或硕士以上学位的申请者，须有两名具有正高专业技术职务的同行专家推荐。11简表项目概况项目名称丝瓜核糖体失活蛋白基因的分离、克隆及表达研究申报学科名称1分子生物学代码1180.37名称2基因工程代码2180.7110起止年限2005年1月至2007.年12月项目主要

4、成员姓名性别年龄学位职称（职务）现工作单位项目主要研究内容和目标本课题研究采用异硫氰酸胍一步法从未成熟丝瓜籽中提取核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingproteinRIP)的总RNA，逆转录合成cDNA，并根据cDNA序列设计合成PCR引物，用RT-PCR方法克隆RIP的基因(luffin-a、luffin-b和luffin-s)序列，通过和载体质粒的连接构建核糖体失活蛋白基因的表达载体并在大肠杆菌中进行表达，然后对表达产物进行鉴定。为进一步开展转基因植物，提高植株的抗虫和抗病能力的RIP基因工程和蛋白质工程的

5、研究提供实验参考。11推荐意见（说明项目的意义和取得预期结果的可能性。申请者的业务素质及研究能力、现有工作条件等、项目组成员不得作推荐人）推荐人（签章）专业技术职务专长工作单位推荐人（签章）专业技术职务专长工作单位11一、本研究项目的立项依据和目标1、本项目研究的意义及同类研究工作国内外研究现状与存在的问题，并列出主要参考文献：核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingproteinRIP)是一类广泛存在于高等植物细胞中的能专门作用于真核细胞，抑制核糖体功能的毒蛋白。它具有RNAN－糖苷酶，能够对核糖体大亚基上的rR

6、NA进行脱腺嘌呤作用，从而破坏核糖体结构和功能，抑制蛋白质的生物合成。核糖体失活蛋白分两类：Ⅰ型RIP（单链）和Ⅱ型RIP（双链）。目前大量研究表明,RIP除了直接抑制蛋白质生物合成外，还具有抗生育、抑制肿瘤细胞生长、抗艾滋病病毒等诸多生物活性，同时又能作为免疫导向药物，是最有希望的专一性抗癌药物。近年，人们发现核糖体失活蛋白具有多核苷酸：腺苷糖苷酶活性，进一步解释了它作为防御蛋白的生物功能。RIP在理论研究和实际应用中都具有重要的意义。理论上RIP对核糖体的作用可以作为研究蛋白质与核酸相互作用的模型；应用上，以RIP为“弹头”的免

7、疫毒素在肿瘤和自身免役疾病的治疗研究中已取得了很好的效果，展现出巨大的药用前景；同时RIP在动植物抗病毒等方面也有潜在的应用前景，RIP抗寄生虫和真菌病害的效果优于以前广泛使用的苏云金毒素和蛋白酶制剂。因此，分离RIP基因并构建基因表达载体，用于转基因植物，以提高植株的抗虫和抗病能力将是今后研究的热点之一。现在国际上已经开展了RIP基因工程和蛋白质工程的研究，我国RIP基因工程的研究也已启动，目前，有报道大麦RIP基因已成功地在烟草中得到了表达。核糖体失活蛋白存在于很多植物中，其中葫芦科植物中含有丰富的RIP。目前已发现来源于葫芦科

8、及其他科的RIP同样也具有抗肿瘤、抗HIV的活性。Luffin是存在于丝瓜（Luffacylindrica）籽中的一组单链RIP，包括luffin-a、luffin-b和luffin-s。其中luffin-a、luffin-b是迄今报