他卡西醇对人表皮黑素细胞调控作用的研究

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1、他卡西醇对人表皮黑素细胞调控作用的研究暨南大学硕士学位论文他卡西醇对人表皮黑素细胞调控作用的研究他卡西醇对人表皮黑素细胞调控作用的研究中文摘要目的探讨他卡西醇对体外培养的人表皮黑素细胞增殖、黏附、迁移的调控作用及其对c-kitmRNA相对表达量的影响。通过上述实验,为他卡西醇在白癜风复色治疗中的作用机制提供一定的理论及实验室依据。方法用不同浓度的他卡西醇干预体外培养的人表皮黑素细胞,采用XTT法分别检测培养24h、48h及72h后黑素细胞的增殖活性,用纤维连接蛋白包被细胞培养板检测培养72h后黑素细胞的黏附率,用

2、Transwell微孔膜法检测培养24h后黑素细胞在纤维连接蛋白上的迁移情况,经RT-PCR法检测培养72h后黑素细胞c-kitmRNA相对表达量。结果-10-61.他卡西醇在浓度为10~10mol/l范围内对人表皮黑素细胞增殖无明显抑制作用。当浓-8度为10mol/l的他卡西醇与黑素细胞共同培养48h、72h,与对照组(不加药仅添加完全培养基)相比,能显著促进黑素细胞增殖,差异有统计学意义(P分别为0.029、0.044)。-8-72.他卡西醇浓度为10~10mol/l范围内与对照组(不加药仅添加完全培养基)相

3、比,可显著促进人表皮黑素细胞在纤维连接蛋白(FN)上的黏附,差异有统计学意义(P分别为0.003、0.007)。3.依据前面细胞增殖活性的结果,各浓度他卡西醇对人表皮黑素细胞无明显毒性反应,选-9-8择共同培养24h的细胞进行后续的迁移实验。结果显示,浓度为10~10mol/l的他卡西醇与对照组(不加药仅添加完全培养基)相比,在培养24h时能显著促进黑素细胞迁移(P分别为0.003、0.000)。-9-74.经RT-PCR半定量分析结果表明,浓度为10~10mol/l的他卡西醇与对照组(不加药仅添加完全培养基)相

4、比,在培养72h均能显著增加黑素细胞c-KitmRNA的相对表达量,差异有统计学意义(P均为0.000)。结论1.他卡西醇能够促进体外培养的人表皮黑素细胞的增殖,增强黑素细胞在FN上的黏附能力及诱导黑素细胞在FN上的迁移作用;I暨南大学硕士学位论文他卡西醇对人表皮黑素细胞调控作用的研究2.他卡西醇可部分上调人表皮黑素细胞c-kitmRNA的相对表达量,且c-kitmRNA表达的变化与黑素细胞黏附及迁移作用有一定相关性,他卡西醇可能通过上调c-kit表达从而促进人表皮黑素细胞的黏附、迁移。关键词他卡西醇;黑素细胞;

5、增殖;黏附;迁移;c-kitII暨南大学硕士学位论文他卡西醇对人表皮黑素细胞调控作用的研究TheregulationoftacalcitolonthehumanepidermalmelanocytesAbstractObjectiveTostudytheregulationoftacalcitolonthecellproliferation,adhesion,migrationandeffectoftheexppressionofmRNAforc-kitontheculturedhumanepidermalmel

6、anocytes,inordertoprovideatheoreticalbasisandlaboratorybasisfortherepigmentationtreatmentofvitiligoMethodsWeinterventedtheculturedhumanepidermalmelanocyteswithdifferentconcentrationsoftacalcitol.ThecellproliferationwasdeterminedbyXTTassayafterculturefor24h、48

7、hand72h,whiletheadhesionrateofmelanocyteswasdetectedbyFN-coatedcultureplatesafterculturefor72h,themigrationofmelanocytesweretestedbytranswellmicroporousmembraneassayafterculturefor24h,theexpressionofmRNAforc-kitofthemelanocyteswasdeterminedbysemiquantitativer

8、eversetranscriptionPCRafterculturefor72hResult-10-61.Attherangeof10~10mol/loftacalcitolshowednosignificantinhibitionoftheproliferationonhumanepidermalmelanocytes.wheninterventedthemelanoc