在原代培养的人细胞滋养细胞中激活素a对血管内皮生长因子及其受体表达的影响

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1、中国医科大学硕士学位论文在原代培养的人细胞滋养细胞中激活素A对血管内皮生长因子及其受体表达的影响姓名：戴进申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：尚涛20060401ｌ，…ｊ・７・英文缩略语中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申

2、请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：啦魄掣７中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外），以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师

3、签名：日期：在原代培养的人细胞滋养细胞中激活素Ａ对血管内皮生长因子及其受体表达的影响目的血管内皮生长因子（ＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）家族是一类多功能的细胞因子，在血管生成和淋巴管生成中具有直接和间接的调控作用，可促进内皮细胞增殖、促进血管生成以及增加血管的通透性。血管内皮生长因子在女性生殖方面贯穿从受精到胎儿分娩全过程，在滋养细胞增殖与侵入及胎盘的发生发展过程中有重要作用。在妊娠早期，胎儿一胎盘的生长发育主要取决于细胞滋养细胞（Ｃｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ，ＣＴＢ）分化和子宫胎盘血

4、管网络的构建。ＣＴＢ存在两条截然不同的分化途径，一方面可分化形成合体滋养细胞（Ｓｙｎｃｙｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ，ＳＴＢ），执行妊娠分泌功能；另一方面分化形成侵润型滋养细胞（ＩｎｖａｓｉｖｅＣｙｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ），向母体侵润，分化并替代血管内皮细胞，降鳃血管平滑肌及弹力纤维，以至血管腔扩大，血流阻力下降，血流量增加，形成高排低阻血管，进行母胎界面的血管重铸。这种血管“重铸”是由细胞滋养细胞逐渐分化为类血管内皮细胞并替代螺旋小动脉血管内皮细胞而完成的。细胞滋养细胞分化和（或）替代不良导致的植入期血管“重铸”障碍是妊娠失败和某些疾病

5、的发生机制。激活素是ＴＧＦ—Ｂ家族中的一员，由于在垂体前叶可刺激ＦＳＨ的的释放的功能而被分离纯化出来并被命名。近年来的有关激活素的研究表明，激活素在多种生物系统中发挥重要的作用，尤其是在细胞增殖分化、凋亡和癌变中的功能备受关注。激活素由Ｂ亚基构型的不同而分为三型，即激活素Ａ、激活素Ｂ和激活素ＡＢ。激活素在人体组织中分布广泛，其中胎盘中只有激活素Ａ表达。近年来的研究表明激活素Ａ可通过调节ＶＥＧＦ的表达而参与血管生成。ＭａｅｓｈｉｍａＫ等报道激活素Ａ诱导体外培养的牛动脉血管内皮细胞（ＢｏｖｉｎｅＡｏｒｔｉｃＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌ

6、ｓ，ＢＡＥＣ）形成血管。在此过程中有明显的ＶＥＧＦ及其受体的表达升高，应用激活素Ａ的拮抗剂卵泡休止素可阻抑血管生成，得出激活素Ａ可调节ＶＥＧＦ的表达进而诱导ＢＡＥＣ形成血管的结论。有关激活素Ａ是否可调节人细胞滋养细胞分泌ＶＥＧＦ国内外尚无人报道。本实验通过建立人细胞滋养细胞无血清培养方法，探讨激活素Ａ在人细胞滋养细胞中对ＶＥＧＦ分泌是否具有调节作用。若此项研究成功，一方面可以从胚胎植入发生机制人手，为“有效”的妊娠提供备选分子，以期应用于试管婴儿等辅助生殖技术中；另一方面，由于某些疾病患者胎盘中存在着激活素Ａ和ＶＥＧＦ的异常表达，可应用

7、此机制深入探讨疾病病因，并提供早期诊断筛查指标，如妊娠期高血压疾病等。方法本研究以正常妊娠６－８周的绒毛组织为材料，用无血清培养方法体外培养人细胞滋养细胞。免疫细胞化学确认人细胞滋养细胞中ＶＥＧＦ及其相应受体ｎＴ一１，ＫＤＲ一２的表达。ＲＴ—ＰＣＲ检测激活素Ａ作用前后人细胞滋养细胞的ＶＥＧＦ，Ｆｕ’一１及ＫＤＲ一２的ｍＲＮＡ表达。结果无血清培养细胞滋养细胞有ＶＥＧＦ及其受体ＦＬＴ一１和ＫＤＲ一２的表达。ＶＥＧＦ表达部位主要集中在细胞膜，其次在细胞质中；而ＦＬＴ—Ｉ表达部位主要集中在细胞膜上；ＫＤＲ二２表达于细胞质中。ＲＴ—ＰＣＲ结果

8、显示激活素Ａ可显著上调ＶＥＧＦ，ＦＬＴ一１和ＫＤＲ一２的ｍＲＮＡ水平表达，并存在剂量依赖关系。结论无血清培养的细胞滋养细胞有ＶＥＧＦ及其受体ＦＬＴ一１和ＫＤＲ一２的表达。激活素Ａ刺激可显著上调ＶＥＧＦ，Ｆ