脓汁和粪便标本中病原菌的检测

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1、脓汁和粪便标本中病原菌的检测（作者：bibi）默认分类2010-05-2016:56:39阅读65评论0字号：大中小 摘要： 目的从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。方法培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定。结果脓汁标本形成黄、白两种颜色菌落，均为革兰氏阳性菌，均对青霉素和链霉素敏感；粪便标本形成紫黑和粉红色两种菌落，均为革兰氏阴性菌，对青霉素不敏感，对链霉素敏感。四种细菌均对广谱抗菌素庆大霉素敏感。关键词：脓汁粪便微生物细菌菌落生化鉴定药敏

2、试验 引言：常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。这次实验我们从浓汁标本中检出的是金黄色葡萄球

3、菌、白色葡萄球菌，从粪便标本中检出的是大肠埃希菌、痢疾志贺菌。更重要的是我们了解了，医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握了微生物试验的基本技能和基本原理，树立了牢固的无菌观念。同时培养学生自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。培养学生从临床标本中分离细菌以查找与疾病有关的病原体，为临床治疗预后调查提供一定的价值 1.实验器材： 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21型生物显微镜、1500W电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平

4、、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子 2.实验方法： 2.1培养基的制备、消毒和灭菌培养基制备的一般程序：①   调配→溶化→矫正pH→分装→灭菌→检定→保存。②   干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定→保存。2.2细菌的分离与培养2.2.1采用平板划线分离法，将取脓汁和粪便标本中混杂的多种细菌，分别在普通平板和伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h，从而分离

5、出单个菌落。2.2.2细菌群体生长特征的观察。观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。2.2.3细菌的纯培养。脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落；粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。挑选这四种不同菌落分别在斜面培养基上接种，标记，在37℃培养18h。2.3细菌个体形态特征的观察2.3.1取两块玻片，在每块玻片上加生理盐水3～4ul，2滴，在一块玻片上取黄色和紫黑菌苔少许（1mm小菌落的半量）与盐水混匀，涂成1cm2；在另一块玻片上取白色和粉红色菌苔少许（1mm小菌落的半量）

6、与盐水混匀，涂成1cm2。经在空气中干燥后，再用酒精灯对其进行固定。2.3.2革兰染色。用结晶紫对以上两块玻片进行初染1分钟，水洗；再用卢戈碘液媒染1分钟，水洗；然后用95％乙醇对其进行脱色约20秒钟，水洗；最后用稀释复红复染1分钟，水洗；吸干，在显微镜下镜检。2.4细菌生化反应鉴定2.4.1糖发酵试验用接种针分别挑少许紫黑和粉红色的细菌接种到葡萄糖发酵管和乳糖发酵管中，在37℃下，培养24小时，观察其产酸产气情况。2.4.2细菌药物敏感性试验接种环分别取黄、白、紫黑、粉红色四种菌液3～6ul×2环，

7、各自在四个平板上，作平板密集划线接种细菌（纱窗样）。设计三点，三点之间等边三角距离，点距离平皿边缘约15mm。作标记：青、链、庆。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸片，平贴在已设定的位置上，按压，最后镊子火焰灭菌。37℃18～24小时培养，观察结果。2.4.3血浆凝固酶试验取二滴兔血浆置于洁净的玻片上，分别用接种环取白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合，立即观察结果。2.4.4半固体接种法接种针斜面取四种不同颜色的细菌，各自接种进四个半固体培养基，从半固体培养基中心，垂直刺入，到达培养基底部

8、4/5处，再循原来的路线，退出接种针。在37℃下,培养24小时，观察结果。2.4.5痢疾血清玻片凝集反应取载玻片1张，滴加痢疾血清和生理盐水各15ul，2滴。用接种环挑取少许紫黑色菌落和粉红色菌落，各自与上述混合液液滴混匀，观察结果。 3.实验结果： 3.1脓汁和粪便中的细菌在普通琼脂平板和伊红美蓝平板上的菌落特征结果显示：脓汁标本在普通培养基上形成白色和黄色两种菌落；粪便标本在伊红美蓝培养基上形成紫黑色和粉红色两种菌落 图一脓汁标本在普通培养基上的生长