链球菌和葡萄球菌分离鉴定

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1、青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目:链球菌和葡萄球菌分离鉴定姓名:学院:动物科技学院班级:马业科学1201学号:2012任课教师:温建新二0一四年四月十二日链球菌和葡萄球菌分离鉴定班2012指导教师温建新摘要:为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌,我们将用过氧化氢试验,甘露醇试验,凝固酶试验等方法进行鉴别,并根据他们的不同性质出现不同的结果,得出菌的种类。关键词:葡萄球菌;链球菌引言:葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】,因常常堆聚成葡萄串状而得名。多数葡萄球菌为非致病菌,少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌。白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形

2、或卵圆形,常葡萄状排列,革兰氏染色阳性,无鞭毛,无荚膜,不产生芽胞,呈球形或稍呈椭圆形,直径1.0um左右,排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛,不能运动。无芽胞,除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色,其衰老、死亡或被白细胞吞噬后,以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高,在普通培养基上生长良好,在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳,需氧或兼性厌氧,少数专性厌氧【2】.,多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖,产酸不产生气。致病性菌株能分解甘露醇.链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】,属于厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴,所

3、以通常成对或者链状的。因为这些特征,他们被称作“链球菌”.球形或卵圆形,直径0.6~1.0um,多数呈链状排列,短者4~8个细菌组成,长者有20~30个细菌组成。链的长短与菌种及生长环境有关,在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜,如延长培养时间,荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。无芽胞,无鞭毛,有菌毛样结构,含M蛋白,革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类,产酸不产气,需氧或兼性厌氧,有些为厌氧菌。营养要求较高。【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光

4、滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落,不同菌株有不同溶血现象。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环【3】。1材料与方法1.1材料1.1.1待鉴定菌A.B各一,健康兔。1.1.2试剂及其配制1:5兔血浆,革兰氏染色液,百分之三的过氧化氢溶液1.1.3器材:普通营养琼脂平板,血琼脂平板,甘露醇微量发酵管。无菌注射器,碘酒棉,酒精棉,无菌离心管,无菌平皿,离心机,接种环,小试管,载玻片。1.2方法1.2.1划线分离,由接种环以无菌操作分别沾取少许待分离的材料A,B.。在无菌平板表面进行平行划线、,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分

5、散开来。如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落。分别取待测A,B菌于普通培养基划线培养和血琼脂培养基。置于37摄氏度培养18至24小时。1.2.2血平板制作取营养琼脂(PH7.6),加热使其溶解待冷至45-50℃,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加兔血5-10毫升,轻轻摇匀,立即倾注于平板或分装试管,制成斜面备用1.2.3兔心脏取血法和大、小鼠心脏取血法类似,且比较容易掌握。将兔固定在手术台上,用碘酒酒精消毒皮肤,选择心搏最明显处穿刺,针头刺入心脏后即有血液涌入注射器。取得所需血量后,迅速将针头拔出,这样心肌上的穿孔易于闭合。经

6、6~7天后,可以重复进行心脏采血。1.2.4生化鉴定:分别取待测菌A,B。取2毫升百分之三的过氧化氢溶液,加入干净的小试管中,用细玻璃棒蘸取试验菌,插入过氧化氢液面下,发现B有气泡产生,为葡萄球菌,A为链球菌。1.2.5形态鉴定:进行革兰氏染色。1.2.6凝固酶试验:挑取细菌菌苔,混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆,同时用已知阳性菌株作对照,置37摄氏度培养2至4小时,观察结果,凝固者B为阳性。1.2.7甘露醇发酵实验:将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中,置37摄氏度培养24小时,观察情况。2结果与分析2.1普通琼脂是直径1到2毫米的白色或米色略微凸起的

7、光滑球面,菌落呈圆形,湿润,不透明,边缘齐整。血液琼脂平板:多数病菌株形成明显的溶血。但链球菌比葡萄球菌的效果明显。2.2过氧化氢酶试验若有气泡产生,B则为葡萄球菌,A否则为链球菌。2.3凝固酶试验:挑取细菌菌苔,混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆,同时用已知阳性菌株作对照,置37摄氏度培养2至4小时,观察结果,凝固者为阳性。2.4甘露醇发酵实验:将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中,置37摄氏度培养24小时,观察情况。3.1结果讨论经试验结果鉴定A为链球菌,B为金黄色葡萄球菌。3.2操作的过程中可能出现的问题:触媒实验①3%H2O2溶液要新鲜配制。  ②

8、不宜用血琼脂平板上生长的菌落,因红细胞含有触酶,可致

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