免疫缺陷动物转基因动物

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1、免疫缺陷动物（Immunodficientanimal）是指由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物。一、T淋巴细胞功能缺陷动物（一）裸小鼠(Nudemouse)1962年Grist在非近交系小鼠中偶然发现有个别无毛小鼠，后来证实是由于基因突变造成的，并伴有先天性胸腺发育不良，称为裸小鼠(nudemice)，用“nu”表示裸基因符号。1966年Flanagan证实这种无毛小鼠是由于第11号染色体等位基因突变引起的。1968年Pantelouris发现裸小鼠失去了正常胸腺结构，淋巴结胸腺依赖区的淋巴细胞消失，外周血中淋巴细胞

2、数目减少。1969年丹麦Rygaard首先将人结肠腺癌移植裸小鼠获得成功。这些发现引起了医学和生物学工作者极大的兴趣，为免疫缺陷动物的研究和应用开辟了新局面。裸小鼠的主要特征是无毛（hairless）、裸体（nude）和无胸腺（athymus），并随年龄增加皮肤变薄，头颈部皮肤皱褶。发育迟缓。由于裸小鼠无胸腺，仅有胸腺残迹或异常的上皮细胞，且这种上皮不能使T细胞正常分化，缺乏成熟T细胞的辅助、抑制及杀伤功能，因而细胞免疫力低下，不能执行正常成熟T细胞的免疫功能。裸小鼠B淋巴细胞正常，但功能有欠缺，免疫球蛋白主要是IgM，只有少量IgG。成年裸小鼠（6-

3、8周龄）较普通小鼠有较高水平的NK细胞活性，但幼鼠（3-4周龄）的NK细胞活性低下。裸小鼠粒细胞也比普通小鼠数量少。饲养和繁殖条件要求比较严格。一般所用的笼具、垫料、饲料、饮水等都得经过灭菌消毒并采用隔离器或在SPF环境下饲养。在生产上一般用纯合型雄鼠与杂合型雌鼠交配（♂nu/nu×♀nu/+）可获1/2纯合型仔代。国内常用品系为BALB/C-nu/nu，C57BL/6J-nu/nu，C3H/He-nu/nu和AKR-nu/nu。不同近交系裸小鼠因其遗传背景不同，所表现的细胞免疫反应和实验检查指标也不尽相同，具有不同的生物学特征，在研究中要注意选用。另

4、外，随着裸小鼠年龄增长或其它因素（如病毒感染）的影响，裸鼠体内的正常T细胞有可能增加，故接种肿瘤实验一般采用4-8周龄裸小鼠。裸小鼠在生物医学研究中的应用人类肿瘤移植研究在肿瘤药物治疗和肿瘤免疫研究方面免疫和遗传研究微生物研究内分泌和老年学上的应用生物制品和药品的检定在临床医学方面人类肿瘤移植于动物的历史?免疫排斥问题?眼前房，脑内，地鼠的颊囊等免疫逃避部位?免疫抑制剂、射线照射的使用?裸鼠作为人类肿瘤受体实验中常用腹水瘤和实体瘤两种方式进行移植。1.对于会产生腹水的肿瘤，可将其一定数量的细胞注入受体动物腹腔形成腹水瘤或产生腹水。2.实体

5、瘤移植：1)小块接种法:在无菌条件下，把实体瘤切成2～3mm小块，植于受体动物皮下。肿瘤移植的方法?肿瘤组织块或肿瘤细胞皮下移植?腹腔内或肾包膜下移植?原位移植2)悬液接种法：在无菌操作下选择瘤组织，剪成小块，放入研磨器中配制成1：10的瘤细胞生理盐水悬液。用注射器吸取0.1～0.2毫升注入实验动物的腋窝中部外侧皮下3)瘤组织匀浆接种法：将选好的瘤组织，用组织研磨器研磨成匀浆(不加生理盐水)，用较粗大的针头吸取，作皮下或肌肉注射移植途径人体肿瘤裸鼠移植成功的影响因素1.人体肿瘤细胞本身的特征：恶性程度：恶性和转移复发瘤成功率较高种类：细胞系成功率>活检

6、标本来源：淋巴瘤、骨肿瘤等难获成功部位：肿瘤块的外周部接种易成活2.裸鼠的背景：3.移植部位和途径：皮下接种通常以腋下为好；肾包膜下接种成功率高于皮下；脑内接种的成功率最高；近来，原位移植受重视。4.宿主性别5.鼠龄：4-6周6.裸鼠的健康及洁净状况（二）裸大鼠（Nuderat）裸大鼠最早是1953年在英国Rowett研究所发现的。1983年引入中国。裸大鼠一般特征似裸小鼠，体毛稀少，但头、四肢和躯干仍有稀少被毛，尾根往往多毛。发育迟缓。繁育能力差，繁殖方法与裸小鼠相同。由于其无胸腺，免疫力低下，裸大鼠与裸小鼠一样易感各种疾病，易患呼吸道疾病，特别是在

7、环境较差时，易感溃疡性气管炎和化脓性支气管炎等，但在适宜环境下，比裸小鼠更强壮，寿命更长。在免疫缺陷特征方面，免疫器官的组织学与裸小鼠相似，幼龄裸大鼠的解剖发现，有胸腺残迹，内有未分化的上皮细胞，淋巴结、脾等胸腺依赖区的淋巴细胞缺失；先天性无胸腺，无T细胞，但B细胞功能正常，NK细胞的活力较正常鼠高。（三）其它T细胞功能缺陷动物?无毛牛（BeummerStedt,1978）?无毛豚鼠（O’Donghue&Reed,1981）?无毛豚鼠:与裸小鼠和裸大鼠有明显的相似性，可用来代替裸小鼠和裸大鼠，由于其体型较大，更适合肿瘤移植和生长研究或外科手术等，同时是

8、皮肤病和巨细胞病毒（CMV）研究的有用模型。?垂体机能减退的侏儒（Dwaff）小鼠，其隐性突变