脉管系统寄生虫的病原检查

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1、脉管系统寄生虫的病原检查　由于脉管系统内寄生虫的寄生部位及离体途径的不同，决定了病原学检查方法的不同。弓形虫滋养体速殖子阶段也可寄生在血液的有核细胞内。本章主要介绍丝虫、血吸虫、疟原虫、利什曼原虫、锥虫及巴贝虫的病原学检查。有关免疫学及分子生物学检查方法见其它网页。一、血膜染色法血液检查是诊断疟疾、丝虫病、巴贝虫病和锥虫病的基本方法。从指尖或耳垂取血，婴儿可于足部取血。先用75％酒精棉球擦拭取血部位，待干后持采血针迅速刺入皮肤1～2mm深，挤出血滴涂片。间日疟宜在发作后数小时采血；恶性疟在发作初期采血可见大量环状体，1周后可见配子体。丝虫成虫寄生于淋巴系统，

2、但产出的微丝蚴主要在血循环中，且具有夜现周期性，故采血应在晚9时至次晨2时之间进行为宜。1．血膜制片疟原虫检查多用薄血膜或厚血膜法，前者取血量少，涂面大，疟原虫分散，但虫体形态结构清晰，易于作虫种鉴别；后者取血量较多，红细胞较集中，在疟原虫数量较少时便于发现，但因制片时血细胞相互堆积挤压，疟原虫皱缩变形，缺乏经验者较难辨认。故最好在同一张载玻片上同时做厚、薄血膜（如下图），以便比较观察。血液涂片的制作（1）薄血膜制片：在载玻片1／3与2／3交界处蘸血一小滴（约2μl），以一端缘光滑的载片为推片，将推片一端置于血滴之前，并与载片形成30～45度的夹角，待血液沿

3、推片端缘扩散时，均匀而迅速适当地用力向前推成薄血膜。血量不宜太多或太少，两玻片间的夹角要适当，否则血膜会过厚或过薄。推片时用力要均匀，一次推成，切勿中途停顿或重复推片。理想的薄血膜，应是血细胞分布均匀，无裂缝，整个血膜呈舌形。（2）厚血膜制片：于载玻片的另一端1／3处蘸血一滴（约3μl），以推片的一角，将血滴自内向外作螺旋形摊开，使之成为直径约1cm的厚血膜。厚血膜为多层血细胞的重叠，约等于20倍薄血膜的厚度。过厚则血膜易脱落，过薄则达不到浓集虫体的目的。将厚、薄两种血膜涂在同一张载玻片上，方法是将载玻片分成六等份，将厚血膜涂在第三格的中央，薄血膜涂在第四格

4、前缘至第六格中部，一、二格备贴标签及编号用。厚、薄血膜需用蜡笔划线分开，以免厚血膜溶血时影响薄血膜或薄血膜用甲醇固定时影响厚血膜。检查微丝蚴时，需取血3大滴，（相当于60mm3），涂成直径约1．5～2．0cm的圆形或2．5cm×1．5cm长方形厚血膜。血片充分晾干，用甲醇或无水酒精固定薄血膜。如薄、厚血膜在同一玻片上，切勿将固定液流到厚血膜上。厚血膜上滴加蒸溜水进行溶血，待血膜呈灰白色时，将水倒去，晾干后再用甲醇固定。2．染色（1）姬氏染色法（Giemsastain）：此法染色效果良好，血膜褪色较慢，保存时间较久，染色技术也易掌握，适用于染大批量血片标本。①

5、染液配制：姬氏染剂粉1g，甲醇50ml，纯甘油50ml。将姬氏染剂粉置于研钵中，加小量甘油充分研磨，加甘油再磨，直至50ml甘油加完为止，倒入棕色瓶中。然后分几次用少量甲醇冲洗钵中甘油染粉，倒入玻瓶直至50ml甲醇用完为止，塞紧瓶口，充分摇匀，置65℃温箱内24小时或室温阴暗处1～2周后过滤，备用。②染色方法：用pH6．8～7．0的缓冲液，将姬氏染液稀释，比例约为15～20份缓冲液加一份姬氏染液。用蜡笔划出染色范围，将稀释的姬氏染液滴于已固定的薄、厚血膜上，染色半小时（室温），再用上述缓冲液冲洗。血片晾干后镜检。（2）快速姬氏染色法：姬氏染液1ml，加缓冲液

6、5ml，如前法染色5分钟后用缓冲液冲洗，晾干后镜检。（3）瑞氏染色法（Wright’sstain）：此法操作简便，适用于临床诊断，但甲醇蒸发甚快，掌握不当易在血片上发生染液沉淀，并较易褪色，保存时间不长，多用于临时性检验。①染液配制：瑞氏染剂粉0．1～0．5g，甲醇97ml，甘油3ml。将瑞氏染剂粉加入甘油中充分研磨，然后加少量甲醇，研磨后倒入瓶内，再分几次用甲醇冲洗钵中的甘油溶液，倒入瓶内直至用完为止。摇匀，24小时后过滤待用。②染色方法：瑞氏染剂含甲醇，薄血膜不需先固定；厚血膜则需先经溶血，待血膜干后才能染色。染色前先将溶过血的厚血膜和薄血膜一起用蜡笔划

7、好染色范围，以防滴加染液时外溢。滴染液使覆盖全部厚、薄血膜，30秒至1分钟后加等量蒸馏水，轻轻摇动载玻片，使蒸馏水和染液混合均匀，此时出现一层灿铜色浮膜，约3～5分钟后用水缓慢从玻片一端冲洗（注意勿先倒去染液或直对血膜冲洗），至血膜呈现紫灰色为止，晾干后镜检。在镜检薄血膜过程中，有时遇见与疟原虫类似的物体，应加以区别。如单个血小板附着于红细胞上，易误认为环状体或发育中的滋养体。成堆的血小板易误认为成熟裂殖体。血小板中央部常呈紫红色颗粒状结构，周边部分着色浅，但不如疟原虫紫红色的胞核与浅蓝色的胞质分得清楚。此外还有染液沉淀颗粒以及偶有细菌、霉菌、尘粒、白细胞碎

8、片重迭于红细胞上，很象环状体或滋养体。但这些类似物大