普通生物化学实验讲义-基础性、综合性实验部分

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1、生物化学实验讲义基础性、综合性实验部分80目录基础性实验：实验一7220分光光度计的使用2实验二蛋白质部分性质的测定5实验三用Folin-Wu法定量测定血糖的含量8实验四肝糖原的提取和鉴定10实验五双缩脲法测定蛋白质的浓度11实验六氨基酸的纸层析法12实验七醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白13实验八胰蛋白酶活力测定14实验九酵母RNA的提取及鉴定15实验十DNA的定量测定-二苯胺法16实验十一维生素C的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）17实验十二聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法分离牛血清蛋白18实验十三粗脂肪含量的测定-索氏抽提

2、法20实验十四微量凯氏定氮法测定蛋白质的浓度21附录1实验须知与安全措施23附录2普通实验技术简介24附录3实验记录和实验报告的书写28综合性实验：第一章海藻酸钠的提取及部分性质的测定30实验一、海藻酸钠的提取30实验二、海藻酸钠旋转粘度的测定33实验三、海藻酸钠分子量的测定—乌氏粘度法36实验四、海藻酸钠红外光谱的测定42第二章酸性磷酸酯酶的提取45实验一酸性磷酸酯酶的提取45实验二酶促反应进程曲线的制作47实验三酸性磷酸酯酶的酶活力测定50实验四酸性磷酸酯酶米氏常数的测定52实验五酸性磷酸酯酶的检测——SDS-PAGE

3、电泳法56第三章鱼皮明胶的提取及脯氨酸含量的测定62实验一、鱼皮明胶的提取62实验二、鱼明胶中脯氨酸含量的测定65第四章海洋无脊椎动物消化酶的提取及分析技术68实验一、贻贝消化酶发提取及应用69实验二、壳聚糖酶活力的测定73实验三、胞外纤维素酶和β-葡萄糖苷酶活力的测定77第五章中性蛋白酶的固定化82实验一、中性蛋白酶活力测定82实验二、中性蛋白酶的固定化87实验三pH对游离和固定化中性蛋白酶催化活性的影响90实验四温度对游离和固定化中性蛋白酶催化活性的影响9480生物化学实验讲义基础性实验部分实验一7220分光光度计的使

4、用一、实验目的1．了解分光光度计的基本原理。2．熟悉7220分光光度计的使用。二、实验原理溶液中有色物质对特定的波长由特定的吸收，可用分光光度计进行定性和定量的分析。三、药品1．高锰酸钾溶液(100ug/ml)称取100mg高锰酸钾溶解到1000ml蒸馏水中。2．重铬酸钾溶液（200ug/ml）称取200mg重铬酸钾溶解到1000ml蒸馏水中。3．硫酸铜溶液（20mg/ml）称2gCuSO4。H2O溶解到100ml蒸馏水中。四、实验仪器1．试管15*150mm2．试管架3．7220分光光度计五、操作1．按下表测量几种溶液对

5、不同波长的光吸收（以蒸馏水最为空白调零）,观察不同物质对不同波长的吸收情况。波长(λ)AKMnO4AK2CrO7ACuSO4420nm530nm760nm2．测量KMnO4的特征吸收峰，以波长(λ)为横坐标，光吸收(A)为总坐标，绘制波长从420nm~620nm的光谱曲线（波长每10nm测一次光吸收，吸收峰附近每5nm测一次，每测一次都以蒸馏水调零）。六、7220型分光光度计的简介（一）仪器的主用用途7220型光栅分光光度计能在近紫外、可见光谱区域内对样品物质作定性和定量的分析。该仪器可广泛应用于医药卫生、临床检验、生物化

6、学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一。（二）仪器的工作环境1．该仪器应安放在干燥的房间里，使用温度为5～35℃。802．使用时放置在坚固平衡的工作台上，且避免强烈震动或持续震动。3．室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。4．尽量避免高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。5．不宜直接向仪器吹，以免影响仪器的正常使用。6．避免在硫化氢、亚硫酸、氟化氢等腐蚀性气体的场所使用。（三）仪器的主要技术指标及规格1．光学系统：单光束、衍射光栅。2．波长范围：330～800nm。3．光源：钨卤素灯。

7、4．接受元件：端窗式GD-31光电管。5．波长精度：+-2nm.6．波长重现性：0.5nm。7．光谱宽带：6nm.8．杂散光：1％～（T）(在360nm处)。9．吸光度测量范围：0～1.999（A）。11．浓度直读范围：0～1999（A）.12．光度精度：A．透光度线性精度+-0.5％（T）.B．吸光度精度+-0.004A(在0.5A处)。13．透光度重现性0.5％（T）.（四）仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下，发生了对光的特定吸收的效应。各种不同的物质具有其各自的吸收光谱，因此当某种光透过溶液

8、时，其能量就会被吸收而减弱，光能减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，即符合Lambert-Beer定律。LgI0×I=kCl式中：I0:入射光强度；I:出射光（投射光）强度；K:消光系数，是一常数，对于同一物质和同一波长的单色光而言，其值不变；C：溶液的浓度；L:溶液的厚度（cm）,即光径。令A=l