曲霉k-27生淀粉水解酶的生产

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1、外文翻译曲霉K-27生淀粉水解酶的生产学生：李玺指导老师：张俊会摘要：从土壤中分离的曲霉K-27，能产生胞外糖化酶和α-淀粉酶，以小麦淀粉为碳源，而且在α-D-葡萄吡喃糖甲苷的媒介下，其生产能力增加了一倍。粗酶制剂是一种70%糖化酶和30%α-淀粉酶的混合物，可以良好的降解谷物淀粉，块茎和根淀粉，并且降解马铃薯淀粉的初始速度是玉米淀粉的72%。关键词：生淀粉，水解，谷物淀粉引言：淀粉及衍生产品广泛应用于食品工业。葡萄糖是利用α-淀粉酶和糖化酶从淀粉水解得到的主要产品，它可以用于生产果糖，乙醇，和其他产品。最近，人们从节能的角度对程序的生化和生物原淀

2、粉转化成葡萄糖和酒精产生很大的兴趣（上田1981）。在先前的研究中，我们制定了一个选择微生物生产生消化淀粉酶和审查其消化率的方法（贝格曼等人。1988）。其中，曲霉k-27产生的一种酶不仅对玉米也对马铃薯淀粉粒具有优秀的水解活性，将淀粉转化成葡萄糖。在这项研究中，我们调查k-27淀粉酶的生产性能。方法和材料：真菌，曲霉k-27，按以前报告中的方法从土壤中分离（伯格曼等人的方法。1988）。材料和试剂：小麦和玉米，木薯淀粉由三denpun工业公司生产（奈良，日本）的。马铃薯和红薯淀粉由我们的实验室准备。马铃薯支链淀粉和直链淀粉在我们的实验室分割（hi

3、zukuri等人。1981）。甲基-D-葡萄糖苷（A-MG）甲基-FL-D-葡萄糖苷（β-MG），商用产品。生长条件和接种：生产所用基本培养基包含（每升蒸馏水）20g小麦淀粉，1gHNH4NO3,1.4gKH2PO43,g0.8g固体玉米浆，0.5gMgSO4-7H20,0.5gKCI，0.1g酵母提取物和0.01gFeSO4•7H20，高压灭菌前pH值调整到6.2，15分钟（121°℃）将曲霉k-27孢子接种到有5ml培养基的试管，45℃培养24h，然后转移到装有100ml培养基的500ml培养瓶中，继续摇床培养。培养后，先通过纱布过滤，然后用惠

4、特曼绿/玻璃过滤器过滤，滤液即为粗酶制剂。酶的检测：淀粉酶活性测定方法有两种。方法A和以前报告中的是相同的（伯格曼等人的方法。1988）。方法B，50μL粗酶液加入200μL含有2％可溶性淀粉的水中，45℃培养15min。将试管在沸水浴中浸泡一分钟后反应被终止，产生葡萄糖的含量可以通过测定氧化酶过氧化物酶的方法来测定（Kilburne和泰勒1969年）。酶液用50mM含0.02％牛血清蛋白的醋酸缓冲液稀释，防止因高稀释而引起的失活（武田和Hizukuri1972年）。1个酶活性单位定义为在特定的条件下1min能产生1Iμmol葡萄糖或者还原性糖等同

5、于葡萄糖的酶的含量。用洛瑞等人的方法测定蛋白质（1951年）。结果与讨论：K-27品系的表征：K-27在45摄氏度生长良好，在上马铃薯葡萄糖和麦芽提取物培养基上即使55℃也能生长。菌丝隔膜，无色，分生孢子梗无色，简单和根尖肿胀;分生孢子头，柱状紧凑;瓶梗孢子，黄绿色，生于单孢子梗。未发现有性生殖。根据这些特点，该k-27品系似乎属于烟曲霉群体（瑞普和内尔1965），但它的菌丝颜色，分生孢子，和最高生长温度与典型的品系有所不同。详细的分类，目前正在进行中淀粉酶的生产和增强：图1显示了典型模式的变化：pH值，碳水化合物的含量和酶量，此外A-MG的媒介在

6、培养过程中的有或无。曲霉。k-27在45℃蓬勃发展，但我们因为不溶性碳源不能确定细胞团。这种真菌的生长似乎停止在2-3d，因为几乎所有的碳源在第3d消耗。酶的产生从增长期后开始，并且在加入或者不加入A-MG的情况下分别在培养5d后达到12.5lU/ml或5.5U/ml的最大值。在两种条件下ph和碳水化合物的浓度变化基本相同，a-MG是酶生产的代谢诱导物。加入小麦淀粉，葡萄糖或麦芽糖醇代替a-mg没有影响。加入相反的葡糖苷异构体，β-MG，使淀粉酶的产量降低至1.1U/ml。这些结果和在链霉菌/木聚糖酶中相同，木聚糖酶的生产受β-木糖苷诱导，受α-木

7、糖苷抑制。有意思的是α-MG和β-MG参与曲霉。K-27淀粉酶的生产。表1酶学性质：曲霉K-27的酶制剂包括至少两种酶，糖化酶和a-淀粉酶（伯格曼等1988）。这两种酶活性的比例由如下所述的方法确定。将粗酶液的ph调整至3.5，45℃培养，酶的活性可以由方法A和方法B在培养过程中定期测定。如表2所示，两种酶的活性在前两个小时内都迅速下降并达到稳定水平（10U/ml），相当于由方法A所确定的初始活性的70％，并在培养过程中保持更长的时间。由方法B所测的初始活性是方法A的80％，说明粗酶制剂除了产生葡萄糖还产生了低聚糖。这些结果说明了：（1）粗酶液约7

8、0％的活性是由糖化酶提供的：（2）糖化酶相当稳定，在这这种条件下几乎所有α-淀粉酶都很容易失活。这个比例（大约7：3）在培