hplc同时测定多种维生素检测方法

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1、HPLC同时测定多种维生素检测方法   热     ★★★［作者：叶颖慧    转贴自：北京市营养源研究所分析室    点击数：2076    更新时间：2004-6-22    文章录入：admin］减小字体增大字体一、    本人情况介绍1.科研水平我于2001年7月来到北京市营养源研究所分析室，工作两年期间一直从事水溶性维生素的检测工作，对于目前水溶性维生素的检测现状有较充分的了解，能够熟练使用荧光分光光度计、紫外-可见光分光光度计及高效液相色谱仪。现在正参加科技部课题的工作。2.科研手段应用方面进步情况本课题利用维生素B1、维生素B2、维生素B6、泛酸

2、、烟酰胺及维生素C在紫外区域不同波长处均有较强吸收的性质，食品、保健食品和浓缩饲料中6种水溶性维生素经前处理后,使用反相高效液相色谱法同时进行分离、测定，通过改变波长可以同时测定这六种水溶性维生素。方法快速、简便、准确。采用具有二极管阵列检测器的高压液相色谱仪，具有可随意调整波长的能力，并可观察到紫外全波段的三维图像，可对测定后的同一谱图进行分析。在一次测定后的谱图上通过改变波长至某种维生素紫外最强吸收处，可以得到令人满意的色谱图。一、           合同执行情况介绍1.项目介绍由于食品与饲料工业的发展，使得食品与饲料中维生素的分析显得十分重要，但由上文

3、可以看出维生素传统测定方法大多步骤烦琐，检测周期长，操作费时，其中一些方法受干扰因素影响大，灵敏度较低，而用户要求测定结果准确、测定周期短、经济合算，这就导致对维生素快速分析方法的需要越来越迫切。而由于高效液相色谱法分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快的特点，使得早在二十世纪七十年代，国外就有人采用高效液相色谱法同时测定多种水溶性维生素。1977年美国的WillsRB和ShawCG等人首先采用两根色谱柱C18和NH2柱，使用带有离子对试剂的缓冲溶液-甲醇作为流动相测定水溶性维生素。在这之后的二十几年中也有很多人采用高效液相色谱法测定水溶性维生素，或采

4、用梯度淋洗方式，或对各种维生素含量相差较大的样品需用两种不同的流动相不能同时，测定分析时间长，大多为单纯方法研究或针对某一种或某一类产品如药物、新鲜草莓、甜玉米、血液、生物发酵液中水溶性维生素的测定。从检测维生素的种类来看，1999年王雪梅等采用HPLC法测定新鲜草莓中4种水溶性维生素的含量，其回收率为96.1~107.7%，而2000年荷兰人MorenoP等采用HPLC法同时测定药物中8中维生素，其回收率仅为78~116%。由此可见，检测的水溶性维生素种类越多，其回收率就明显下降。大多数的较老高效液相色谱仪不具有二极管阵列检测器，每进一针只能在一个波长或两个

5、波长下检测。本课题使用的ShimadzuLC-10Avp型高压液相色谱仪具有二极管阵列检测器，能够在进一针的情况下看到全紫外波长下的谱图，这样就可以找到六种维生素在紫外波长下的最大吸收处，提高检测的灵敏度。结合六种维生素最大吸收处的波长，本课题选取了200nm、244nm、269nm三个测定波长，在200nm下对维生素B1、维生素B6、泛酸、烟酰胺进行测定，244nm下对维生素C进行测定，269nm下对维生素B2进行测定。本课题提出了两种不同的HPLC法对六种维生素进行测定，方法一为磷酸-乙腈系统，使用色谱柱：DiamonsilTM（钻石）C18，250mm×

6、4.6mm，5μm；流动相：乙腈:0.05％磷酸=15:85；柱温：40℃；流速：0.7mL/min；进样量：20μL的系统对样品中的六种维生素进行测定，出峰顺序为VB1、VC、烟酰胺、泛酸、VB2、VB6，结果发现该系统对于杂质较少，各种维生素含量较高的样品如维生素片，维生素补充剂、多维等适用；方法二为磷酸-乙腈+辛烷磺酸钠系统，使用色谱柱：DiamonsilTM（钻石）C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈:0.05％磷酸+5mmol/L辛烷磺酸钠溶液=15:85；柱温：40℃；流速：0.7mL/min；进样量：20μL对样品中的六种维生素进

7、行测定，出峰顺序为VB1、VC、烟酰胺、泛酸、VB2、VB6，结果发现对维生素分离较好，灵敏度相对较高，对于杂质较多，各种维生素含量较低的样品，如预混料等适用，同时也适用于方法一所适用的样品，由于加入离子对试剂，实验完毕后应延长对系统的冲洗时间。两种方法应当注意的是当样品中各种维生素的含量相差较大时，应稀释后再测定浓度相对较高的维生素。针对不同样品采用不同的前处理方式，如蛋白、淀粉含量较高的样品就应当使用酶解等的方式去除这些杂质，由于这个过程需要高温，而维生素C作为水溶性维生素中重要的一种遇到高温解离，因此此时应对测定维生素C的样品采用单独的前处理方式：使用3

8、%偏磷酸溶液作为溶剂，置于超声波振荡器