乌鸡和家鸡血清成分分析——生化论文

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1、乌鸡和家鸡血清成分分析摘要:实验通过邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇的含量进行定量测定，通过盐析、透析、醋酸纤维素薄膜电泳法将血清清蛋白与γ-球蛋白进行分离与鉴定，可知血清中有清蛋白、α1、α2、β、γ五种蛋白质，同时我们还对血清中的谷丙转氨酶活性进行鉴定及其活力单位的测定。关键词:血清胆固醇清蛋白与γ-球蛋白谷丙转氨酶生化分析前言：血液凝固析出的淡黄色透明液体即为血清，由于其不易凝集，所以用它进行生化实验分析。血清中含有各种基本营养物质（氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物）、激素（胰岛素、肾上腺皮质激素）、生长因子（成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、

2、血小板生长因子）、结合蛋白（白蛋白、转铁蛋白）等，正确分析其生化成分有利于了解其各种功能，比如它如何提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤还有对培养中的细胞起到某些保护作用。1材料与方法：1.1实验材料：乌鸡和家鸡血清1.2实验方法：1.2.1邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇：胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用。产生紫红色物质，此物质对550nm波长的光有最大吸收，可用比色法定量测定。1.2.2盐析法分离提纯蛋白质：球蛋白不溶于半饱和的（NH4）2SO4溶液，γ-球蛋白不溶于1/3饱和度的(NH4)2SO4溶液，而清蛋白仅不溶于饱和的（NH4）2SO4

3、溶液。因而。可以利用不同浓度的（NH4）2SO4溶液使血清或其他混合蛋白质中的这些不同的蛋白质分开。1.2.3透析法脱盐与蛋白质浓缩：透析是利用蛋白质等生物大分子不能通过半透膜的性质的一类纯化方法，可利用该方法分离大分子与小分子的混合物。由于NH4+和SO42-可以通过半透膜，而血清清蛋白不能，因此，可以利用透析的方法使清蛋白溶液脱盐。利用半透膜还可以进行大分子溶液的浓缩。将盛有待浓缩的大分子溶液的透析袋放入高浓度的吸水性强的蔗糖固体颗粒中，袋内溶液中的水被袋外的多聚物所吸收而有效地浓缩。1.2.4醋酸纤维素薄膜电泳法分离与鉴定血清清蛋白：醋酸纤维素薄膜电泳

4、法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维素薄膜是用二乙酸纤维素制成的，它具有均一的泡沫样的结构，厚度仅为120μm，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为取代电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用广泛、没有吸附等特点。71.1.1凝胶过滤层析：凝胶层析也称凝胶过滤，是一类利用有一定孔径范围的多孔凝胶的层析技术。当样品流经这类凝胶的固定相时，不同分子大小的各组分因进入网孔受阻滞的程度不同而以不同的速度通过层析柱，从而达到分离的目的。当样品通过层析柱时，分子量较大的物质因为不能或较难通过网孔而进入凝胶颗粒，而是沿着凝胶颗粒间的间隙流动，所以

5、流程较短，向前移动的速度较快，即受阻滞的程度较小，最先流出层析柱；反之，分子量较小的物质，因为颗粒直径小，可通过网孔而进入凝胶颗粒，所以流程较长，向前移动的速度较慢，即受阻滞的程度较大，流出较晚。1.1.2纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用：观察肝糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。为防止丙酮酸被肝糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂溴乙酸。1.1.3分光光度法测定血清丙转氨酶的活力：用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，经转氨作用生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二

6、硝基苯腙，此物质碱性条件下呈棕红色，其颜色的深浅与丙酮酸的含量成正比，可用比色法进行定量测定。通过与标准溶液的比较，即可计算出酶的活力单位数1.2实验器材：1.2.1台秤吸管剪刀滤纸试管及试管架分光光度计电热恒温水浴锅电子分析天平电炉玻璃漏斗研钵（两个）三角烧瓶分光光度计坐标纸凝胶柱速离心机玻璃棒大培养皿（以下仪器都需多种规格）量筒锥形瓶容量瓶刻度吸管微量进样器烧杯2实验结果：2.1邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇2.1.1邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇——标准曲线的绘制编号试剂编号编号编号编号编号01234标准胆固醇应用液/mL00.10.20.30.4醋酸/m

7、L0.40.30.20.10邻苯二甲醛试剂/mL0.20.20.20.20.2蒸馏水/mL0.010.010.010.010.01混合酸/mL4.04.04.04.04.0100mL血清中总胆固醇含量/mg01002003004007A550nm0.0000.2050.3670.5610.6681.1.1胆固醇含量类型数据乌鸡家鸡吸光度0.1620.243胆固醇含量（100ml/mg）82.47130.121.2凝胶过滤层析实验结果1.洗脱曲线例子溶质数溶液体积7实际洗脱曲线1.1醋酸纤维素薄膜电泳法分离与鉴定血清清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的实验结果1.全血清

8、电泳图谱2.血清清蛋白电泳图谱3.γ-球蛋白电泳图谱