反义核酸抗肝炎病毒研究进展

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1、反义核酸抗肝炎病毒研究进展摘要病毒性肝炎的治疗一直是困扰人类的一个难题。目前可利用的药物仍屈指可数．反义核酸技术的发展为箴病毒性肝炎的治疗带来了新的希望。利用赧反义DNA，反义RNA和核酶技术来抑锋制乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒和丁型肝钧炎病毒，在体外已进行了大量的研究，体瑶内也进行了一些研究，为临床应用反义核菝酸治疗病毒性肝炎奠定了基础。关键词酯反义核酸，抑制，肝炎病毒学病毒性肝炎是人类与其长期抗争的恶魔，迄今已发┺现有7种类型。由于病毒性肝炎的传染性拎强，尤其是乙型及丙型病毒性肝炎可形成舢慢性感染，造成肝细胞的持续损伤，加重肝脏病变，

2、常导致病情反复发作，长期迁棒延不愈，部分病人可发展成肝硬化和肝癌旧，危害极大。近年来，对病毒性肝炎的研扎究有较大的进展，但能有效治疗病毒性肝鳜炎的临床药物仍屈指可数，尤其是对慢性苷乙型及丙型病毒性感染，临床可用的药物ヴ仍是各型干扰素，对有选择性的病人来说爻，其治愈率也只有30％～40％［1］篙。因此寻找一种有效的抗肝炎病毒药物已锑成为迫在眉睫的问题。由于病毒的遗传物质不同于宿主细胞，从基因治疗的角度牲去发现新的抗病毒药物已成为近几年来的胪研究热点。反义核酸技术是一种新的基因顽13/13治疗技术，包括反义寡核苷酸，反义RN槿A及核酶三大部分

3、。反义寡核苷酸是一段鲔反义的DNA序列，能与特异性的靶序列情互补，抑制靶基因的表达。由于它特异性前强，毒副作用小而成为人们研究抗病毒药樾物的热点。近几年来已有几种抗病毒反义额寡核苷酸药物进入临床试验阶段。反义R对NA是指一段与mRNA互补的RNA分子，是通过将正常cDNA反向插入到启动子下游后转录产生的。核酶是一种小的RNA分子，能以序列特异的方式在特定￣的位点断裂RNA分子，从而阻断特异蛋认白的表达。核酶的抗病毒作用也引起了研缕究者的广泛兴趣和关注。本文主要对近几⒙年来应用反义寡核苷酸，反义RNA和核△酶技术抗肝炎病毒的研究进展作一

4、简要综觜述。1反义核酸抗乙型肝炎病毒病毒蚍性乙型肝炎以其感染面广，慢性化和难以苄治愈而成为临床治疗的难点。目前，全世迮界约有3亿人感染HBV，我国乙型肝炎病毒表面抗原的携带率占全国人口的％，吓占全世界感染者的1／3强。干扰素是目允前临床上唯一可用于治疗HBV感染的药园物，但治疗效果不好，随着反义寡核苷酸Ξ技术的产生和发展及对HBV基因结构，愫功能和复制等主要环节的认识和了解，应乎用ASON来抑制HBV基因的复制和表达在体外已进行了大量的研究，体内也进帽行了一些研究。体外研究主要采用转染了洋HBVDNA并能长期稳定分泌病毒的肝鬲癌细胞系进

5、行的。分别针对HBV基因的¤13/13吸附、转录、反转录、翻译和包装等阶段锕设计出各类ASON，体外抑制HBV的复制．主要的靶部位有PreS、DR1畹、Pol、SP启动子转录mRNA帽区矫、S基因、C基因、PolyA增强信号区、RNA前导序列等，针对这些部位设擢计的ASON均能不同程度的抑制HBs瀵Ag，HBeAg或HBcAg的表达，对病毒DNA也具有不同程度的抑制作用狄［2，3］。Korba等［4］针对以萋上不同部位合成了56条不同的硫代ASON，分别检测了它们对细胞中HBsA恒g，HBeAg，HBcAg及HBVD郭NA的抑制效果

6、，结果表明：包含S基因容起始编码子的ASON均能有效抑制HBㄘsAg的产生和病毒颗粒的释放，但不影细响细胞内HBV的复制；针对C基因的A丶SON能抑制病毒颗粒的产生和细胞内H沼BcAg和HBVDNA复制中间体的水平；针对HBV包装信号的茎环结构上游掠的ASON能最有效的抑制HBV的复制茸，但针对HBeAg和HBV聚合酶基因区的ASON却不能影响HBV的复制。弊Goodarz等［5］针对HBV基因崭S区的5个位点设计了6段ASON，以峒μmol／L的终浓度与PLC／PRF5共同孵育72h后检测HBsAg的分屹泌量，结果发现，针对前4个位

7、点设计的々ASON对HBsAg有明显的抑制作用船，其中以S基因翻译起始区的作用最强，老抑制率达96％。我国姚志强等［6］的馋研究也表明针对HBVmRNASP2增匪强子帽区，polyA增强信号区的硫代噪ASON能有效抑制HBsAg的产生，镙抑制率达85％～90％，对HBeAg为的抑制率也近50％～60％。国内还有缢其他一些单位也展开了类似的工作。由于豫13/13缺乏一个很好的动物模型，对抗HBV反嚎义寡核苷酸的体内作用研究进展较慢。1免993年，Offensperger等迕［7］第一次用针对PreS基因5′区ぴ的反义寡核苷酸AS2以20μg每

8、克体梭重的剂量腹腔注射到鸭肝炎病毒感染的北诜京鸭中，连续10d，DHBV的复制几慊乎被完全抑制，血清中的DHBsAg及骛肝中的HbcAg也消失了。Moriy惯a［8］等用一个转染