甘草中甘草素的质量检测研究.

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1、HPLC法测定不同产地甘草中甘草苷的含量方法一：建立甘草中甘草苷含量测定的HPLC法，测定不同产地甘草中甘草苷的含量，以控制其质量。［方法］HPLC色谱条件为分析柱为KromasilC18柱(4．6mm×25cm，5μm);流动相为乙腈－0．5%醋酸溶液(V/V，1∶4);流速为1．0ml/min;柱温为25℃;紫外检测波长为270nm;采用外标法定量测定。［结果］甘草苷在0．1～1．2μg范围内呈良好的线形关系(r=0．9999)，其平均加样回收率和RSD值分别为97．86%和2．04%(n=6)。［结论］该方

2、法操作简单、准确、快速、重现性好，可作为甘草苷的定量分析方法。色谱条件的确定。HPLC色谱条件为:分析柱为Kro-masilC18柱(4．6mm×25cm，5μm);流动相为乙腈－0．5%醋酸溶液(V/V，1∶4);流速为1．0ml/min;柱温为25℃;紫外检测波长为270nm;采用外标法定量测定。1．2．2对照品溶液的制备。取适量甘草苷对照品，溶于甲醇制成0．15mg/ml的对照品溶液。1．2．3供试品溶液的制备。取供试样品0．25g，置于50ml量瓶中，加40ml70%甲醇，超声处理45min，放冷，滤过，

3、加70%甲醇定容置刻度，摇匀，静置，即得。HPLC法测定甘草酸和甘草苷的含量*:方法二：建立以HPLC法同时测定甘草中甘草酸和甘草苷含量的方法。方法:采用C18柱（4.6mm×15cm，5μm）为分析柱；以乙腈—1％醋酸溶液为流动相；流速为0.6ml·min-1；柱温25℃；采用外表法定量测定。结果表明甘草酸在4.16-28.0μg/ml范围内，回归方程为Y=10562.8X+30963(r=0.9999)；甘草苷在13.0-23.4μg/ml范围内，回归方程为Y=12857.4X+16437(r=0.9997)

4、，平均加样回收率均大于96.08%，日内、日间的RSD值分别小于1.41%和1.85%。结论本方法操作简单、准确、快速、重现性好，其它组分干扰少，可用于甘草酸和甘草苷的含量测定。色谱条件色谱柱采用C18分析柱，（4.6mm×15cm，5μm）；柱温：25℃；流速：0.6ml/min；流动相A为乙腈，流动相B为1%醋酸溶液；进样量：10μl。溶液的制备对照品储备液精密称取甘草酸单铵盐和甘草苷9.89mg，9.45mg，分别置于50ml量瓶中，分别用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为41.6μg/ml和26.0μg

5、/ml的贮备溶液。分别吸取1ml贮备溶液混合，用甲醇定容至10ml，即为混合标准液。供试品取甘草粉末0.5g，精密称定，加50ml甲醇，超声处理1h，放冷，滤过，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。HPLC法同时测定甘草中甘草苷、甘草酸、甘草次酸含量方法三：:建立HPLC同时测定甘草中甘草苷、甘草酸、甘草次酸的质量控制方法。方法:色谱条件:KromasC18柱,流动相为乙腈-0·03mol/L醋酸铵,梯度洗脱,检测波长250、276nm,流速:0·7mL/min;柱温:30℃。结果:色谱峰分离情况良好,

6、甘草苷、甘草酸、甘草次酸在各自的浓度范围内均具有良好的线性相关性;加样回收率为98·1%~99·3%,其RSD为1·4%~2·5%。结论:所建方法准确、简便、重现性好,可用于甘草主成分的定量考察。色谱条件　色谱柱:KromasilKR100-5C18,流动相:A为0·03mol/L醋酸铵溶液;B为乙腈,梯度洗脱:0~20min为20%B;20~40min为25%B;40~60min为32%B;60~90min为75%B。检测波长:276nm检测甘草苷,250nm检测甘草酸、甘草次酸。流速:0·7mL/min;柱温

7、:30℃,进样量:20μL。对照品溶液的制备　精密称取甘草苷对照品5mg、甘草酸对照品10mg、甘草次酸对照品1·2mg,用甲醇溶解定容至5mL,作为对照品贮备液。并将其稀释得到甘草苷浓度为0·0164mg/mL、甘草酸浓度为0·0316mg/mL、甘草次酸浓度为0·0037mg/mL的混合对照品溶液。供试品溶液的制备　精密称取甘草0·1g,加流动相A∶B为1∶1,80℃超声30min,定容至50mL,过滤,取续滤液作为供试品溶液HPLC分析甘草中甘草酸和甘草苷含量:研究不同产地、不同生长期的野生与栽培甘草中甘草

8、酸、甘草苷含量的变化,确定其最佳采收期。为了更好地开发利用甘草资源提供理论依据,建立了分析方法,为甘草的现代质量评价体系提供参考数据,扩大甘草药源。采用高效液相色谱测定不同产地、不同生长期野生与栽培甘草中甘草酸、甘草苷的含量。甘草酸在0.4—6μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率(n=3)为101.83%,RSD=0.74%;甘草苷在0.4—6μg范