血浆脂蛋白琼脂糖电泳课件

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1、血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳【目的】掌握脂蛋白的分类及其代谢特点。掌握脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其方法。12琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。D-半乳糖3,6-脱水-L-半乳糖琼脂糖（agarose）【原理】34血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。【原理】5血清脂蛋白(lipoprotein)的组成6分类1.按电泳法分+β前βα血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳图谱乳糜微粒按其移动的

2、快慢，可将脂蛋白依次分为：α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白，乳糜微粒在原点不动。72.按超速离心法分乳糜微粒(CM)极低密度脂蛋白(VLDL)低密度脂蛋白(LDL)高密度脂蛋白(HDL)密度颗粒8（三）结构特征CMVLDL(前β)LDL(β）HDL（α）甘油三脂胆固醇蛋白质带电量（Q）pH8.6为例颗粒大小（mm）密度电泳速度形态多多少少大低慢规则不规则少少多多小高快9pH8.6>pI，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。加样槽β前βαCMLDLVLD

3、LHDL—+10【试剂与器材】1.人血清（预染）2.微量加样器3.电泳仪、电泳槽4.琼脂糖5.巴比妥缓冲液（pH8.6）11【操作】血清预染制胶适量琼脂糖适量缓冲液琼脂糖胶溶液Δ12123440mL点样孔朝负极–+去封口胶布13血清预染制胶点样3倒上缓冲液，使其恰好没过点样孔。14血清预染制胶点样预染色的标本（15μL）3倒上缓冲液，使其恰好没过点样孔。小心！！！点样孔不要戳破15血清预染制胶点样电泳80－100V，20－30min,负极向正极1617制胶时，要注意梳子的低部要距制胶板1mm以上。(2)凝胶冷却时要水平放置，完全凝固

4、后才能使用。(3)点样时要小心，不要戳穿点样孔。(4)点加样品时，要缓缓加入，不能太快，否则样品容易外溢。(5)样品点于电泳槽负极。(6)吸取预染血清时，应吸取上层，下层或管底可能有染料颗粒沉渣。操作注意事项：1819临床应用：高脂蛋白血症的分型CMβ前βα正常Ⅰ型Ⅱa型Ⅱb型Ⅲ型Ⅳ型Ⅴ型20思考题1.影响电泳迁移率的因素有哪些？2.试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。