HPLC法比较组培与野生穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的含量.doc

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1、HPLC法比较组培与野生穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的含量作者：林吉吉，王秦福，张辉，王丹【摘要】目的:建立用高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元含量的方法，比较两种穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量。方法:采用AgilentZORBAXExtend-C-18反相色谱柱，流动相为乙腈-水（90:10），检测波长为206nm，流速为1ml.min。结果:薯蓣皂苷元在0～6μg范围内，其峰面积与浓度呈良好的线形关系（r=0.9999），平均回收率为101.00%，RSD为2.08%（n=5）。结论:两种穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的含量无显著差异（P>0.05）。【关键词】高效液相色谱法;薯蓣皂苷

2、元;含量测定穿龙薯蓣为薯蓣科植物薯蓣（Dioscoreaopposita）的干燥根茎。具有补脾养胃，生津益肺，补肾涩精的功效，用于治疗脾虚食少，久泻不止，肺虚喘咳，虚热消渴等症，其主要有效成分是薯蓣皂苷元。本文用高效液相色谱法，对组织培养快繁育苗的栽培品种与野生穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的含量进行测定，比较两种药材的内在品质，为穿龙薯蓣组培品种的推广应用提供依据。　　1仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦牌）;N-2000色谱工作站（浙江大学提供）;超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司产品）;Sartorius十万分之一电子天平（德国Sartoriu

3、s）;薯蓣皂苷元对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供）;穿龙薯蓣（经鉴定为正品）;所用甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果［1，2］2.1色谱条件色谱柱:AgilentZORBAXExtend-C-18反相色谱柱;柱温:室温;流动相:乙腈-水（90:10）;流速:1ml.min;检测波长:206nm。2.2对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇溶解，摇匀，制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取药材粗粉（20目）3g，精密称定，置150ml圆底烧瓶中，加硫酸（1mol.ml）40%乙醇溶液50m

4、l，置沸水浴中回流4h，放冷，加水100ml，摇匀，滤过，沉淀，用水洗至滤液不显酸性，沉淀烘干，分3次加三氯甲烷（每次10ml），超声清洗3次，每次30min，氯仿液蒸干，残渣转移至10ml量瓶中，甲醇溶解，并稀释至刻度，用微孔滤膜滤过，取滤液为供试品溶液。32.4线形关系考察取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇，使溶解稀释成0.3mg.ml的溶液，分别精密吸取0、5、10、15、20μl，注入液相色谱仪，以薯蓣皂苷元峰面积积分值为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），进行线形回归，得回归方程:Y=771273.88+43208.23X，r=0.9999。结果表明

5、，薯蓣皂苷元在0～6μg范围内其峰面积与进样量呈良好的线形关系。2.5精密度试验精密吸取同一对照品溶液5μl，按相同色谱条件重复进样5次，测定其峰面积为374841.594、396140.813、394531.188、392483.188、387750.406，平均峰面积为389150，RSD=2.21%，表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验取同一对照品溶液，分别在0、2、4、8、24h精密吸取5μl进样测定，记录峰面积，结果表明对照品溶液在24h内稳定，RSD=2.31%。2.7重现性试验取同一批样品5份，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别进样5μl，测得含

6、量为3.958mg.g、3.863mg.g、4.030mg.g、3.752mg.g、3.900mg.g、平均值为3.901mg.g，RSD=2.67%，表明本法重现性良好。2.8样品含量测定分别精密吸取对照品溶液与各供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，依薯蓣皂苷元含量测定方法，对两种穿龙薯蓣中的薯蓣皂苷元含量进行测定。结果见表1。色谱图见图A～D。表1样品含量测定结果2.9回收率试验精密称取已知含量（3.721mg.g）的样品适量，分别精密加入薯蓣皂苷元对照品适量，按供试品溶液的制备项方法操作，依上述色谱条件进行测定，计算加样回收率，结果见表2。表2回收率试验　　

7、3讨论3.1提取方法的选择本实验曾用几种方法处理样品，结果以本文拟订的方法结果最好，且操作简便，故选用此法。3.2检测波长的选择［3］薯蓣皂苷元的分子光谱仅在206nm处有一中等强度的吸收峰，故选择206nm为检测波长。3.3流动相的选择［4］先后试验了甲醇-水（84:16），乙腈-水（90:10），结果用乙腈-水（90:10）薯蓣皂苷元的分离效果最好，故本实验用乙腈-水（90:10）为流动相，流速为1ml.min。结果表明，两种穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的含量基本相近，组织培养快繁育苗的栽培品种与市场上的野生穿龙薯蓣内在品质相同，为穿龙薯蓣组培品种的推广应用提供依据