基因工程技术操作

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1、基因工程技术操作1.为什么要学习基因工程技术操作？1）只有在实验室才能真正学会和掌握基因工程的重要概念和相关原理。2）只有在实验室才能真正增长知识和才干。3）只有亲手做过的实验才能记忆犹新。2.珍惜实验课的体会：1)基因工程实验的开设来之不易。2)实验课上的学习内容将为你今后的科学生涯打下宝贵的基础。3.实验室常见的仪器设备及用途：1)纯水仪：用途：制纯水注意事项：防止爆炸，防止发水。2)天平：托盘天平（配平实用）电子天平（0.01、0.001、0.0001）3)磁力搅拌器（具有加热功能）4）酸度计用途：配置药品调PH值注意事项：防止腐蚀保护电极4)高压灭菌锅（手动、半

2、自动、全自动）用途：灭菌。注意事项：使用前检查锅内水是否充足使用前设定好灭菌的温度、压力和时间打开和关闭灭菌锅是注意同时旋转对称的螺旋至少待灭菌无稍微冷却后方可去除5)超低温冰箱（--80。C）7）普通冰箱（--20。C）用途：用于贮藏药品、材料等。注意事项：确保冰箱门关严防止冻伤6)超净工作台：用途：用于植物组织培养、微生物接种。注意事项：⑴确保使用状态时紫外灯必须关闭⑵保持清洁⑶不要用酒精擦拭有机玻璃挡板7)恒温培养箱：用途：用于液体培养基中对细菌的培养注意事项：使用前调好温度计转速8)高速冷冻离心机（台式、立式）用途：用于DNA、RNA等提取过程中的高速冷冻离心注

3、意事项：⑴使用前要预冷，调好温度转速等⑵必须调平⑶使用后要关电源，擦拭干净（离心机内部的水珠）9)PCR仪：用途：用于基因扩增注意事项：⑴使用前设好程序⑵使用后关闭电源10)移液器：（0.2—1000μl）用途：用于微量液体的移取注意事项：⑴使用前必须看清楚量程，并在量程范围内使用。⑵使用时要缓慢用力⑶切记避免有机溶剂腐蚀枪杆⑷使用后调至最大量程11)微波炉：用途：融化琼脂糖凝胶，或琼脂粉注意事项：⑴注意微波时间⑵避免污染物污染12)凝胶电泳装置：用途：用于核的电泳的检测注意事项：⑴使用前要注意电泳的方向与电泳槽的正负极是否吻合，设定拟使用的电压，电流等。⑵使用时要戴P

4、E手套，并注意不要产生大量的污染物。13)UV投射仪及凝胶成像系统：用途：用于核算条带的观察及照相注意事项：⑴不要造成EB污染⑵使用时要先开电源，再开紫外，关闭是相反。⑶使用后将凝胶几时拿走放回收处，并使仪器内部保持清洁。14)烘箱：用途：用于烘干器皿注意事项：⑴防止器皿水分过多，造成短路。⑵塑料凳器皿切记不要高温烘烤⑶玻璃器皿等高温烘烤后，注意及时断电，千万不能过夜。15)分子杂交炉：用途：用于Southern、Northern等分子杂交。注意事项：⑴正确设定杂交温度，时间等。⑵防止同位素遗漏，污染。16)恒温培养箱、培养室：用途：生物材料的培养注意事项：⑴正确设定培

5、养温度、湿度、光照时间等培养条件。⑵防止培养箱，培养是污染。⑶注意温度的调节。17)制冰机：用途：制碎冰。注意事项：⑴使用时先接通水源。⑵使用后要关闭水源。18)蛋白质、核算分析仪：用途：测定核算及菌液的浓度。注意事项：⑴使用时要先预热。⑵使用前要调零。⑶要调好光源。19)测序仪：用途：对核算进行测序。注意事项：防止污染、按程序操作。20)基因枪：用途：用于转基因。注意事项：无菌操作，保持清洁。使用时检查是否漏气。21)其他：恒温水浴锅、研钵研杵、液氮罐、电炉子、通风橱、涡旋器、同位素室及暗室。4.常见的有害化学物质：A．苯酚、氯仿、异戊醇。B．溴化乙锭（EB）。C．十

6、六烷基三甲基溴化铵（CTAB）。D．焦乙酸二乙脂（DEPC）.E．放射性元素32P、35S5.安全规程：1)熟悉所有有害物质的标识。2)在不知道正确操作程序时不要使用实验室的药品及仪器。3)不要认为扩大污染源，或随意丢弃污染垃圾。4)如果不小心将有害物质弄到皮肤或衣服上，马上采取有效措施处理。5)严禁在实验室吸烟、饮食、以免误事和吸入有害物质。6)不要穿拖鞋进实验室。实验一大肠杆菌感受态细胞的制备一：实验目的：掌握大肠杆菌感受态细胞的方法和技术。二：实验原理：感受态细胞是经物理化学方法增强获取DNA能力的细菌细胞，其原理是处于0。C的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀呈

7、球形，此时，细菌处于容易吸收外源DNA的状态。三：实验仪器及药品：1.仪器：制冰机、恒温摇床、天平、酸度计2.材料：大肠杆菌DH5α，10ml离心管，1.5ml离心管3.试剂：0.1mol/lCaCl2溶液，80%甘油，LB液体培养基（1L），pH7.0-7.3胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g。四：实验内容：1.用划线法将大肠杆菌DH5α接种于无抗性固体培养基上，与37。C倒置培养1--2天。2.从菌落上挑取一个单菌落接至3ml液体培养基中，37。C振荡培养过夜。3.取0.5ml菌液转到一个装有50mlLB液体培养基的锥形瓶