植物组织培养复习

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1、一、什么叫植物组织培养技术？它有哪些类型？其理论依据是什么？（1）广义的植物组织培养（planttissueculture）是指在无菌和人工预知的控制条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织或细胞进行离体培养，使其再生细胞或生长、分化成完整植株的技术。狭义的植物组织培养仅指对植物的组织（如分生组织、表皮组织、薄壁组织等）及培养产生的愈伤组织（callus）进行离体培养的技术。（2）类型：植株的培养；胚胎培养；器官培养；组织培养；细胞培养；原生质体培养。（3）植物细胞全能性（totipotency）是植物组织培养的理论基础

2、。它是指一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息，在适当的条件下，这些信息可以表达，再生成一个完整植株。三、试述目前植物组织培养的应用。答：（1）植物离体快繁、（2）无病毒苗木培育、（3）培育新品种或创制新物种、（4）次生代谢物生产、（5）种质资源保存（6）人工种子。一、简述培养基和器具的灭菌方法和技术。培养基的灭菌方法：高压蒸汽灭茵法：培养基消毒灭菌时间不宜过长，也不可超过灭菌锅规定的压力范围（1.15kgf·cm-2或O.15MPa，温度126℃)；否则，培养基中的蔗糖、

3、有机物质，特别是维生素类物质就会分解，导致培养基变质、变色，甚至难以凝固。过滤除菌法：过滤灭菌的原理是溶液通过滤膜后，细菌的细胞和孢子等因大于滤膜孔径而被阻。器具的灭菌方法：（1）干热灭菌法干热灭菌法是将器具长时间放在高温下消除杂菌的一种方法。其具体做法是将需要灭菌的器具(玻璃器皿或器械)先用铝箔包好，放入温度设定为150℃的恒温干燥箱内，保温2h，取出冷却后便可以使用。（2）高压蒸汽灭茵法高压蒸汽灭菌法是将需灭菌的玻璃器皿、器械或培养基等放在高压蒸汽灭菌锅内，通过高温高压进行灭菌的一种方法。一般在1.06kg／cm2的压力下(

4、121℃)下保持15～20min，就可达到灭菌效果。对于无菌操作所用的各种器械，如镊子、解剖刀、解剖针等，可采用灼烧灭菌。一般的消毒办法是把它们先在95％酒精中浸一下，然后再置火焰上灼烧，然后放在灭过菌的支架上，待冷却后使用。二、简述植物材料消毒的一般过程。第一步：材料的修整、刷洗、冲洗。第二步：是用洗衣粉水或肥皂水浸洗并搅动。第三步：材料的表面灭菌。四、简述植物组织培养无菌操作技术的一般过程。目前多数实验室都使用各种类型的超净工作台进行无菌操作。具体的无菌操作步骤如下：①在实验之前30min将超净工作台的紫外灯打开，进行灭菌。

5、工作人员要避免紫外线照射。做实验时将紫外灯关闭。②用酒精喷壶或酒精棉将超净工作台消毒（酒精浓度为70％）。③实验操作前，工作人员的手和小臂用70％酒精消毒。③使用的镊子、解剖刀等用90％酒精浸泡，之后放在酒精灯上火烧灭菌，再放在灭菌支架上冷却后使用。④在植入或移植材料的前后，培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌。第二章一、常用培养基分为哪几类？各类的主要特点是什么？MS培养基答：（1）MS培养基：特点是无机盐的浓度高，有加速愈伤组织生长的作用，能满足植物组织对矿质营养的要求。铵盐和硝酸盐含量高，比例也比较适合，也不需要添加更多的

6、有机附加物，这是目前应用最广泛的一种培养基。但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求较低的植物，尤其不适合过高易发生毒害的植物。White培养基：特点是一个无机盐浓度较低的培养基。它的使用也很广泛，同时它还非常适合于生根培养和胚胎培养。B5培养基：它的主要特点是含有较低的铵盐，该营养成分可能对不少培养物的生长有抑制作用，对有些植物如双子叶植物（如豆科植物）特别是木本植物，却更适合生长。N6培养基：其KN03和(NH4)2S04含量高且不含钼，广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养和组织培养。SH培养基：与B5相似，不用(NH

7、4)2S04而改用NH4H2P04，在不少单子叶和双子叶植物上使用，效果很好。马铃薯简化培养基是为适应经济条件较差的农村农科站和中学而设计的，既经济又适用，容易取材，有利于组培技术推广和普及。二、培养基的成分有哪些？各有什么作用？答：目前，不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由水、无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。（1).水分：生物的生命活动离不开水分，构成培养基的绝大部分组分为水分。(2).无机营养物(无机盐)：提供植物所必需的16种营养元素(3).碳源和能源：①作为

8、生长发育的能源；②具有维持培养基一定渗透压的作用(4).维生素类：与植物体内各种酶的形成有关，在植物组织培养中通常以B族维生素为主)(5).氨基酸及有机附加物：是培养基中重要的有机氮源，最常用的是甘氨酸，它能促进离体根的生长，对植物组织培养物的生长也有良好的促进