二乙酰一肟检测尿素

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1、尿素的测定简介尿素又称脲，是体内蛋白质分解代谢的含氮终产物，不与血浆蛋白结合，分子量仅为60，体内生成量受蛋白质摄入量，机体蛋白质分解代谢及肝脏（生成尿素的唯一器官）功能的影响。尿素是表明游泳池水受到人体污染程度的一项重要指标。二乙酰一肟（diacetylmonoxime）法检测尿素（urea）含量原理：尿素与二乙酰在酸性环境中加热可缩合成红色的二嗪衍生物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故通常用二乙酰一肟代替，它与强酸作用，产生二乙酰。后者再与尿素反应，缩合生成红色的二嗪衍生物。临床二乙酰一肟法

2、H+二乙酰一肟+水→二乙酰+羟胺H+二乙酰+尿素→二嗪化合物（粉红色）泳池二乙酰一肟法临床二乙酰一肟法测定尿素1原理尿素与二乙酰一肟在酸性条件下，经镉离子（或三价铁离子）的催化产生缩合，并在氨基硫脲存在下，生成了4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。2试剂2．1酸性试剂：在1L容量瓶中加入蒸馏水约100mL，然后加入浓硫酸44mL及85%磷酸66mL，冷却至室温后加入硫氨脲80mg，硫酸镉2g，溶解后用蒸馏水稀释至1000mL，贮棕色瓶中放冰箱内保存半年不变。2．22%二乙酰一肟溶液：

3、取2g二乙酰肟，溶于蒸馏水中，定容100mL混合均匀，即可使用。尿素使用液：取酸性试剂90mL加2%二乙酰一肟10mL，混合均匀即可。3方法3．1定性测定：取使用液2mL加入试管中，加0.1mL牛奶，在电炉上快速加热至煮沸，保持沸腾1min，观察颜色，用不含尿素样品做比较。正常奶颜色为淡红色，添加尿素的牛奶反应颜色为玫红色。3．2定量测定：取5mL使用液加入0.1mL牛奶，于20mL的螺口试管中，加盖拧紧，于95℃水浴中反应20min，过滤后，于525nm处测定吸光值。4结果由于正常牛奶中含有少量的尿素，所

4、以正常牛奶的反应试管也是有颜色的，由于尿素含量较少，所以颜色为淡红色。尿素含量异常的牛奶，反应后颜色为玫红色。两者的区别明显，在实际的质量控制中，应以正常奶做比较，来判断原料奶中尿素含量的水平，进而做出判断。5小结优点：灵敏度高，操作简单，适用于自动仪器分析。缺点：反应不专一，线性范围窄（<150mmol/L),特异性低，试剂腐蚀性强，加热有异味释放。难以实现自动化。游泳池水中二乙酰一肟的检测方法常采用卫生部颁发的二乙酰一肟分光光度法(简称原法)。二乙酰一肟分光光度法（国标法）1.原理尿素与二乙酰一肟及安替

5、比林反应呈现黄色,在波长460nm处有最大吸收峰,与标准系列比较定量。2试剂2．1二乙酰一肟溶液(2g/L):取0．2g二乙酰一肟[CH3COC(NOH)CH3]溶于10%乙酸中,并稀释至100ml,保存于棕色瓶中。2．2安替比林溶液(2g/L):取0．2g安替比林[C6H5NN(CH3)C(CH3)CHCO]溶于1+1硫酸中并稀释至100ml,保存于棕色瓶中。2．3尿素标准储备溶液(100μg/ml)和尿素标准使用溶液(10μg/ml)。2．4仪器和器材UV-2102C型分光光度计、沸水浴锅、25ml棕色

6、具塞比色管(粗细、玻璃厚薄均匀一致)。3分析步骤3．1吸取水样10ml（尿素含量在0．001～0．015mg范围内）于25ml棕色具塞试管中，另取棕色具塞试管加入尿素标准使用液0、0．1、0．3、0．5、0．7、0．9、1．1、1．3、1．5ml，并用纯水稀释至25ml。（注：显色后溶液遇光退色，故需用标色法）。3．2于上述各管加入1．0ml二乙酰—肟溶液，混均。再加安替比林溶液2．0ml，混匀。3．3将上述试管在沸水浴中加热50min。取出并在流动的自来水中冷却2min。立即以纯水为对照，在460nm处，

7、用1cm比色皿，测定各管吸光值（加热45～55min，呈最深色，若再延长时间吸光值下降）。3．4以浓度对照吸光值，制备标准曲线。以水样吸光值从曲线上查出尿素含量。4小结优点：操作简便、灵敏度高。缺点：线性范围窄、反应时间长、标准曲线相关系数难以达到0.1999以上，对于尿素浓度高的水样,虽可将水样稀释后进行测定,但稀释倍数难以估计,所以需反复重测,既费时,又浪费试剂。二乙酰一肟分光光度法（改进）1原理目前二乙酰一肟-安替比林分光光度计[1]是测定尿素的唯一标准方法,该法存在标准曲线线性范围较窄(011~11

8、5mg/L),吸光度偏低,反应产物不稳定,溶液显色后遇光褪色等多种问题,对检测结果影响较大,为此本法参阅有关文献[2,3],通过摸索,将国标法中的标准曲线扩大,定容体积由25ml改为10ml,使线性范围变宽,吸光度的值增大,标准系列的稳定时间长,结果满意,其准确度、精密度较好,能满足基层实验室的需要。2试剂2．10．2％二乙酰一肟溶液：称取0．2g二乙酰一肟［CH3COC：（NOH）CH3］溶于10％乙酸中，并稀