不同菌株固态生料混合发酵棉籽粕和菜粕

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1、不同菌株固态生料混合发酵棉籽粕和菜粕（1）实验材料基本原料：棉粕，菜粕，玉米培养基原料：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，酵母膏，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，酵母浸膏，K2HPO4，柠檬酸氢二铵，无水乙酸钠，Tween80，MgSO4·7H2O，MnSO4·H2O使用仪器：分光光度计，振荡器（振荡频率120^130次/min往复)恒温水浴，具塞三角烧瓶:100,250mL，容量瓶:25mL(棕色)，吸量管:1,3,10mL，移液管:10,50mL，漏斗:直径50mm，表玻璃:直径60mm。检测试剂和药品：异丙醇，正己烷，

2、冰醋酸，苯胺，锌粉，3-氨基-1-丙醇，氯化钯，羧甲基纤维na（2）菌株准备：（3）培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基(培养芽孢杆菌):牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g(固体培养基加琼脂18～20g)，蒸馏水1L，pH7.0～7.2，120℃灭菌30min。YPD培养基(培养酵母菌):酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g(固体培养基加琼脂18～20g)，蒸馏水1L，120℃灭菌30min。MRS培养基(培养乳酸菌):蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，酵母浸膏5g，K2HPO42g，柠檬酸氢二铵2

3、g，无水乙酸钠5g，Tween801mL，MgSO4·7H2O0.58g，MnSO4·H2O0.25g(固体培养基加琼脂18～20g)，蒸馏水1L，pH6.2～6.8，120℃灭菌30min。PDA培养基(培养黑曲霉):将马铃薯去皮切成小块，称取200g置于锅中，加水1L煮沸约30min，6～8层纱布滤成清液，滤液中加入葡萄糖20g(固体培养基加琼脂18～20g)，补充水分至1L，加热至融化，120℃灭菌30min。（4）发酵条件：原料棉籽粕粉碎过40目筛，将棉粕、菜粕，玉米粉按4∶4∶2比例混匀，料水比1

4、∶0.8，接种量5%，每组设两个个重复置于500ml三角瓶中静止培养24h，48h，72h后取出，于50℃下烘干，粉碎分析测定。（5）实验结果和分析a测定硫代葡萄糖苷（下面）b测定棉酚含量（下面）c测定粗蛋白（按照教科书）d测定粗纤维（按照教科书）饲料中游离棉酚的测定方法2原理在3-氨基一1一丙醇存在下用异丙醉与正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。3试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。3.1异丙醇C(CH3

5、)2CHOH,HG3-1167)3.2正己烷3.3冰乙酸（GB676）3.4苯胺(CsH,NH,GB691):如果测定的空白试验吸收值超过0.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸馏弃去开始和最后的10%蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在(0-4℃)冰箱中，该试剂可稳定几个月。3.53-氨基-1-丙醇(H2NCH,CH2CH2OH）。3.6异丙醇-正己烷混合溶剂:6:4(V/V)。3.7溶剂A:量取约500mL异丙醇、正己烷混合溶剂(3.6),2mL3-氨基一1一丙醇(3.5),8mL冰乙酸(3.3)和50mL水

6、于1000mL的容量瓶中，再用异丙醇一正己烷混合溶剂(3.6)定容至刻度。4仪器、设备4.1分光光度计:有10mm比色池，可在440nm处测量吸光度4.2振荡器（振荡频率120^130次/min往复)。4.3恒温水浴4.4具塞三角烧瓶:100,250mL4.5容量瓶:25mL(棕色)4.6吸量管:1,3,10mL4.7移液管:10,50mL.4.8漏斗:直径50mm.4.9表玻璃:直径60mm5试样制备采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎过2.8mm孔筛，混匀，装人密闭容器，

7、防止试样变质，低温保存备用。6测定步骤6.1称取1-2g试样(精确到。.001g)>置于250ml具塞三角烧瓶(4-4)中，加入20粒玻璃珠，用移液管(4.7)准确加入50mL溶剂A(3.7)，塞紧瓶塞，放入振荡器(4.2)内振荡1h(每分钟120次左右)。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗(4.8)上加盖一表玻璃(4.9)以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于100mL具塞三角烧瓶(4.4)中。6.2用吸量管(4.6)吸取等量双份滤液5-10mL(每份约含50^100yg的棉酚)分别至两个25mL棕

8、色容量瓶(4-5)a和b中，如果需要，用溶剂A(3.7)补充至10mL。6.3用异丙醇一正己烷混合溶剂(3.6)稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。6.4用移液管(4.7)吸取2份10mL的溶剂A(3.7)分别至两个25mL棕色容量瓶(4.5)a。和b。中。6.5用异丙醇一正己烷混合溶剂(3.6)补充瓶a。至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。6.6加2.0mL苯胺(3.4)于容量瓶b和