临床病例中病原性细菌的分离与鉴定

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1、实践五临床病例中病原性细菌的分离与鉴定目的要求初步掌握动物疫病检测的采样技术、病原微生物的接种、分离、培养、纯化技术及鉴定技术练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。实验原理为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离实验材料样品：临床病例培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、肉汤培养基、三糖铁培养基。无菌水：装有

2、45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。试剂：1万U/mL链霉素液、10％苯酚；剪刀，镊子，手术刀，冰块，保温盒，酒精灯实验步骤(一)动物疫病检测的采样技术：重大动物疫病检测中，结果准确与否，样品质量是关键，因此采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法，科学采样采样时注意隔离防护，隔离或防护服进出场要消毒，准备好采样所需的器具家禽采样需要：酒精棉、碘酒棉、5ml注射器、无菌棉签、塑料离心管、签字笔、记号笔、

3、采样单等牛羊采样还需：牛鼻钳、20ml注射器、采血真空管、采样杯、OP液保存容器等猪采样还需：猪保定器、开口器、扁桃体采样器等脏器的采取还需：解剖刀、齿锯、剪刀、手术刀、镊子、病料保存袋等所有病原检测样品都需冷藏箱加冰块保存和运输血清样品的采集家畜采血方法：雏鸡（禽）心脏采血左手抓鸡，竖折，手持采血针，平行颈椎。从胸腔前口插入，回抽风有回稳中有降时，即把针心向外拉，使血液流入采血针成年禽心脏采血助手抓住两翅及两腿，右侧握保定，在触及心博动明显处或胸骨前端，背部下部凹处连线的1/2入消毒，垂直或稍向前方刺入2-3cm，

4、回抽见回血时，即把针心各外拉，使血液流入洒血针成年禽可采取翅静脉采血助手一手握住禽的两腿，另一手握住两翼，在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向静脉丛刺入，见有血液回流即把针心向外拉，使血液流入采血针，每只禽采血液2-3ml做好标记牛羊采血方法牛颈静脉采血用手按住颈静脉沟的下端及近心端，可看到颈静脉隆起，消毒后在颈静脉隆起处，针头向头端方向快速刺入，抽取5ml血，采血完毕用酒精棉球按压并拔出针头也可采用尾静脉采血在牛尾根后下方4-5cm的正中，垂直刺入2-3cm，见有血液回流进入真空采血管奶牛可乳房静脉采血奶牛腹

5、部可看到明显隆起的乳房静脉，消毒后在静脉隆起处，针头向后肢方向快速刺入，见有血液回流进入真空采血管羊的采血方法：选用颈静脉采血，方法同牛颈静脉采血猪的采血方法耳静脉采血：站立保定，助手用力在耳根压静脉的近心端，手指轻弹或用酒精棉球反复涂擦耳静脉，使血管扩张，针头沿血管刺入，见有血液回流接入真空采血管前腔静脉采血：保定器让猪头仰起，露出右腋窝，针头从右侧向心脏方向刺入，回抽见有回血时，即把针心向外拉，使血液流入采血真空管血清分离：采血后针心后拉抽入少量空气，倾向放置，血液凝固前不能晃动以防止溶血，血液经过自然放置数小时

6、，冬天可置37℃恒温箱中1小时左右，见上面析出淡黄色液体即为血清，将血清移到另外的小塑料离心管中，盖紧瓶盖，做好标记，每份血清量不少于0.5ml病原检测样品的采集1、家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集方法取无菌棉签插入鸡喉咙内转动三圈或泄殖腔内转动三圈取出，插入含有1ml含青霉素、链霉素各3000单位的PH值为7.2的pb离心管中，减去漏出部分，盖紧瓶盖，做好标记2、牛羊O-P液的采取方法：先禁食12小时，助手保定牛，消毒碳杯，术者手从牛喉角后沿伸入口腔，抓住舌头，将碳杯送入咽喉，顺吞咽动作将采样杯来回抽动三次即可。将O-P

7、液移入容器或汉克式（Hanks）液中保存。3、猪扁桃体采取技术扁桃体采样器使用：把采样钩拉在扁桃体上，快速扣动板机即可扁桃体采集：用开口器开口，可以看到突起的扁桃体，快速扣动板机取出扁桃体放离心管中病死畜禽的解剖与重大动物疫病检测中，结果准确与否，样品质量是关键，因此采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法，科学采样采样时注意隔离防护，隔离或防护服进出场要消毒，准备好采样所需的器具家禽采样需要：酒精棉、碘酒棉、5ml注射器、无菌棉签、塑料离心管、签字笔、记号笔、采样单等牛羊采样还需：牛鼻钳、2

8、0ml注射器、采血真空管、采样杯、OP液保存容器等猪采样还需：猪保定器、开口器、扁桃体采样器等脏器的采取还需：解剖刀、齿锯、剪刀、手术刀、镊子、病料保存袋等所有病原检测样品都需冷藏箱加冰块保存和运输血清样品的采集家畜采血方法：雏鸡（禽）心脏采血左手抓鸡，竖折，手持采血针，平行颈椎。从胸腔前口插入，回抽风有回稳中有降时，即把针心向外拉，使血液流入