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1、基因枪介导入精子顶体膜相关蛋白32基因疫苗在小鼠骨骼肌中的表达JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences)Sep.2006Vo1.4lNo.5除原生动物,而氯仿处理可以杀死细菌,因此通过B处理的水样中可能仅含有病毒,经过c处理的水样则不含任何具有活性的生物,以这2种方法处理的水样作对照,可以确定水样中是否含有溶藻细菌,大大减少工作量,提高了分离效率.事实上,由于某些细菌处于一种活的非可培养状态,采用传统方法,有些细菌是不能被分离培养的.PCR技术可以快速,灵敏,选择性地扩增微量的DNA片段,16SrRNA序列分析可以揭示微生物种群
2、间的系统发育关系,利用PCR技术,细菌的16SrRNA序列分析技术,直接分析具有溶藻效果的样品中细菌类属和亲缘关系,根据分析结果选择合适的培养基和方法进行分离培养,则能够克服部分溶藻细菌不易培养这一弊端,有利于分离更多的溶藻细菌和更全面地了解水环境l中的藻菌关系.参考文献1赵以军,刘永定.有害藻类及其微生物防治的基础——藻菌关系的研究动态.水生生物,1996,20(2):173?867?2YoshikawaK,AachiK,NishijimaM,eta1.B—Cyanoa—ianeneproductionbymarinebacteriaononcyanide—freeme—d
3、iumanditsspecificinhibitoryactivitytowardcyanobacte—ria.ApplEnvironMicrobiol.2000,66(2):7l83东秀珠.蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册.北京:科学出版社.2001.1054彭超.吴刚,席字,等.3株溶藻细菌的分离鉴定及其溶藻效应.环境科学研究,2003,16(1):375席字,吴刚,张勇,等.一株淡水溶藻细菌的分离鉴定及初步研究.华中师范大学,2003,37(2):2226ImamuraN,MotoikeI,ShimadaN,eta1.Anefficientscreeningapproach
4、foranti—Microcystiscompoundsbasedonknowledgeofaquaticmicrobialecosystem.JAntibiot,2001,54(7):5827KatoJ.AmieJ,MurataY,eta1.Developmentofagenetictransformationsystemforanalga—lydingbacterium.ApplEn—vironMicrobiol,1998,64(6):20618FisherMM,WilcoxLW,GrahamLE.Molecularcharacteriza—tionofepiphytic
5、bacterialcommunitiesoncharophyceangreenalgae.ApplEnvironMicrobiol,1998,64(11):4384(2005—11-03收稿责任编辑姜春霞)基因枪介导人精子顶体膜相关蛋白32基因疫苗在小鼠骨骼肌中的表达臧卫东△陈雪梅任秀花石冰涛郝莉郑州大学基础医学院人体解剖学教研室郑州450052△男,41岁,副教授,博士生,研究方向:生殖机制和分子生物学关键词hSAMP32;基因疫苗;基因枪;骨骼肌;避孕中图分类号Q782摘要目的:观察pcDNA3.1(+)一人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)基因疫苗经基因枪介导肌肉
6、接种后在小鼠体内的表达.方法:BALB/c雌性小鼠6只,实验组鼠(4只)经后腿股内侧肌以基因枪多点注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hSAMP325g,空载体对照组(1只)注射pcDNA3.1(+)载体5g,空白对照组(1只)注射无菌生理盐水200ILl.接种后第7d取小鼠股内侧肌注射部位肌肉,RT—PCR和原位杂交法检测目的基因mRNA的表达,以自制抗血清进行免疫组织化学染色检测目的基因蛋白的表达.取小鼠心,肝,脾,脑,肾,胚胎组织,PCR扩增,行基因疫苗的安全性检测.结果:RT—PCR和原位杂交检测结果显示实验组小鼠注射部位肌肉组织有目的基因及其蛋白的表达,对照组未见表
7、达.实验组小鼠心,肝,脾,脑,肾,胚胎的基因组DNA均未扩增出目的基因条带,说明外源性基因没有整合到宿主染色体.结论:该基因疫苗可在小鼠骨骼肌内有效,安全地表达.ExpressionofgenevaccineofhSAMP32inthemouseskeletalmusclemedicatedbygenegun河南省自然科学基金资助项目511030300?868?郑州大学(医学版)2006年9月第41卷第5期ZANGWeidong,CHENXuemei,RENXiuhua,SHIBingtao,HAOLi
