当归红芪合剂超滤膜提取物对ecv-304细胞血管内皮生长因子mrna表达的影响

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1、当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞血管内皮生长因子mRNA表达的影响【摘要】目的探讨当归红芪合剂超滤膜提取物对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法以体外培养的ECV-304细胞为模型,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,半定量反转录-聚合酶链反应法检测ECV-304细胞VEGFmRNA表达的变化。结果当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞有促增殖的作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；当归红芪合剂超滤膜提取物能够诱导VEGFmRNA的表达,其作用与剂量呈正相关

2、。结论当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞的促增殖作用机制是通过诱导ECV-304细胞VEGFmRNA表达实现的。【关键词】当归；红芪；内皮细胞；血管内皮生长因子　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectoftheultra-filtrationextractfromAngelicasinensisandHedysarumpolybotrys’smixtureontheVEGFmRNAexpressionofECV-304cell.MethodAngelicasinensisandHedysarumpolyb

3、otrys’smixturewererefinedbyultra-filtrationtechnique.ECV-304cellswereculturedasmodel,anditsproliferationwasdetectedbyMTTcolorimetry.VEGFmRNAexpressionwasobservedbysemi-quantitativeRT-PCR.ResultsTheultra-filtrationextract10fromAngelicasinensisandHedysarumpolybotrys’smixturecou

4、ldmarklypromotethegrowthofECV-304cells,therewassignificantdifferencebetweenexperimentalandcontrolgroup(P＜0.05).Theultra-filtrationextractfromAngelicasinensisandHedysarumpolybotrys’smixtureupregulatedVEGFmRNAexpressionwithdose-dependentrelation.ConclusionTheultra-filtrationext

5、ractfromAngelicasinensisandHedysarumpolybotrys’smixturecanmarklypromoteECV-304cellproliferation,whichmayberelatedtotheexpressionofVEGFmRNA.　　Keywords：Angelicasinensis；Hedysarumpolybotrys；ECV-304cell；VEGF　　当归、红芪是甘肃道地药材,当归有补血活血之功效,红芪又名“多序岩黄芪”,具有补气固表、敛疮生肌功效。当归、黄芪按1∶5配伍所组成的当归补血汤是

6、中医补气生血的经典方,现代药理学研究发现红芪、当归有显著的抗心肌缺血作用。益气生血、补血活血中药的药效是否与促进血管新生有关,当归红芪合剂(1∶5)的有效成分中是否具有促进血管新生的活性成分,本研究对此进行了探讨。10　　1实验材料　　1.1药物与细胞系　　红芪购自甘肃宕昌县,当归购自甘肃岷县。人脐静脉内皮细胞(ECV-304),购自中国典型培养物保藏中心。　　1.2试剂　　DMEM培养基,美国Sigma公司产品。胎牛血清,杭州四季青产品。四氮唑蓝(MTT)试剂、碘化丙啶(PI),华美生物工程公司产品。其他化学试剂均为分析纯,天津化工试剂厂提供。

7、　　1.3仪器　　5万分子量超滤膜,甘肃省膜科学技术研究所提供。超滤设备,主要组件为海德能公司产品,甘肃省膜科学技术研究所研制。细胞CO2培养箱：SCP-2000型,美国Shill公司产品。流式细胞仪：XL型,美国Coulter公司产品。酶联免疫检测仪：DG-5031型,国营华东电子管厂产品。　　2实验方法10　　2.1药物制备　　称取当归饮片500g、红芪饮片2500g,混合,加水浸泡,煎煮后倾出药液,趁热棉花过滤,冷却后上超滤设备。首先陶瓷膜微滤当归浓缩液[技术参数为压力0.5kPa/m3、温度25℃、流量100L/(h·m2)]；其次PNA

8、中空纤维超滤膜(截留分子量5万)超滤经微滤处理的红芪、当归配伍的水煎液[压力5～6kg/m3、温度25℃、流量100L/(h·m2)]。