川芎嗪对颈总动脉损伤大鼠血管蛋白激酶c信号通路的干预作用

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1、川芎嗪对颈总动脉损伤大鼠血管蛋白激酶C信号通路的干预作用作者：孙银平，李琴，王煜霞，张大伟，王省，郭勇【摘要】目的观察蛋白激酶C（PKC）-细胞外信号调节激酶（ERK1/2）信号通路在血管再狭窄中的表达及川芎嗪对其的影响。方法制备大鼠血管再狭窄模型，采用川芎嗪干预，观察颈总动脉形态学变化，免疫组化法检测血管PKCζ与ERK1/2表达。结果假手术组动脉结构正常、清晰，无明显VSMC增殖，颈总动脉损伤大鼠血管内腔面粗糙，中层VSMC大量增殖，内膜增厚，川芎嗪处理后VSMC增殖程度降低；与假手术组比较，手术组血管壁PKCζ与ERK1/2表达显著增高（P<0

2、.01）；与手术组比较，川芎嗪中、高剂量组PKCζ与ERK1/2表达显著降低（分别P<0.01，P<0.05），川芎嗪中、高剂量组PKCζ与ERK1/2表达较川芎嗪低剂量组相比亦有显著降低。结论PKCζ-ERK1/2信号通路参与血管再狭窄的形成，川芎嗪可通过抑制该通路实现抗血管再狭窄的作用。【关键词】川芎嗪；血管再狭窄；蛋白激酶C；细胞外信号调节激酶8　经皮穿刺冠状动脉腔内成形术是治疗冠心病的重要措施之一，但是术后仍有30%～50%的患者发生血管再狭窄，严重影响了患者术后的远期疗效。目前认为血管再狭窄的主要病理特征之一是血管平滑肌细胞（vasc

3、ularsmoothmusclecell，VSMC）大量增殖。我们先前的研究显示［1］，内皮素、血管紧张素Ⅱ以及血小板源生长因子与血管平滑肌细胞增殖密切相关，在血管再狭窄形成中发挥重要作用。研究显示［2～4］，胞浆内蛋白激酶C（proteinkinaseC，PKC）与细胞外信号调节激酶（extracellularsignalregulatedkinase，ERK1/2）构成的信号通路参与内皮素、血管紧张素Ⅱ及血小板源生长因子的胞内信号传递。本实验以颈总动脉损伤大鼠为模型，在整体水平上观察血管再狭窄时PKCζ-ERK1/2通路的变化以及川芎嗪(tetrame

4、thylpyrazine，TMP)对该通路的影响，探讨血管再狭窄的发生机制，并为防治血管再狭窄提供实验依据。　　　1材料与方法　　1.1动物模型与实验分组　　参照文献制备颈总动脉狭窄模型［5］。体质量在280～300g的健康雄性SD大鼠50只（河南省实验动物中心），随机分为①手术组：戊巴比妥钠腹腔麻醉后，用两片已消毒夹板分别置于动脉上、下侧，止血钳持续钳夹25min后松开，移去夹板。缝合伤口，回笼饲养。②TMP低剂量组：于术前3d开始腹腔注射盐酸川芎嗪溶液（无锡市第七制药有限公司）20mg/（kg·d）。③TMP中剂量组：于术前38d开始腹腔注射盐酸川芎嗪

5、溶液60mg/（kg·d）。④TMP高剂量组：于术前3d开始腹腔注射盐酸川芎嗪溶液100mg/（kg·d）。⑤假手术组：左侧颈总动脉不上夹板，余操作同手术组。　　1.2组织学研究手术14d处死大鼠，取左侧颈总动脉，4%多聚甲醛固定，然后经包埋、切片、苏木素-伊红染色后，在光镜下观察。　　1.3测定血管PKCζ与ERK1/2的表达　　采用免疫组化法：切片厚度0.6μm、脱蜡至水，PBS冲洗，3%H2O2灭活内源性酶，正常山羊血清封闭20min，分别加入PKCζ与ERK1/2抗体（武汉博士德）4℃过夜，复温1h，PBS冲洗后，加入生物素化二抗孵育37℃30mi

6、n，PBS冲洗，滴加SABC，PBS冲洗。最后DAB显色，脱水、透明，中性树胶封片。采用HPIAS-10009型计算机图像分析系统（郑州太阳电子科技公司）测定平均灰度值，每张切片随机选４个视野，得其平均灰度值总数，然后取平均值。　　1.4统计学处理　　所有数值均以±s表示，采用SPSS11.0计算机统计软件。多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验。8　　2结果　　2.1形态学观察假手术组颈总动脉各层结构正常、清晰,无明显VSMC增殖；手术组血管内腔面粗糙，中层VSMC大量增殖并向内膜下迁移，内膜增厚；中、高剂量TMP处理后VSMC增殖程度降低。

7、　　2.2血管PKCζ与ERK1/2的表达　　与假手术组相比，手术组大鼠颈总动脉VSMCPKCζ与ERK1/2表达显著增强（P<0.01）；与手术组相比，TMP低剂量组PKCζ与ERK1/2的表达无显著差异，但有减弱趋势；TMP中、高剂量组PKCζ的表达明显降低（P<0.01），ERK1/2表达亦明显降低（P<0.05）。并且与TMP低剂量组相比亦有显著差异。结果见表1。表1TMP对颈总动脉损伤大鼠血管PKCζ与ERK1/2表达的影响（略）　　　　3讨论8　　川芎嗪是从伞形科植物川芎根茎中分离提纯的有效成分，其化学结构为四甲基吡嗪，广泛用

8、于高血压、冠心病等疾病的预防与治疗。研究表明［6］川芎嗪具有扩张冠