免疫学实验之对流免疫电泳

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1、免疫学实验第二次实验遵义医学院麻醉学系2010级K—1班33学号：1020550107对流免疫电泳实验内容【原理】对流免疫电泳（CIEP）：基于抗体抗原的等电点彼此不通，在通电的琼脂凝胶中抗体向负极泳动，抗原向正极泳动。一般抗体（IgG）的等电点位pH5~9,血清蛋白抗原的等电点位pH4~5,所以在pH8.2~8.6的缓冲溶液中，抗体所带的负电荷较少，正电荷较多,同时还受电渗作用，向负极泳动；抗原带正电荷少负电荷多，分子也较小，电泳迁移快。在抗体和抗原的对向泳动时，两者相遇于最适比例处形成白色沉淀线，可肉眼观察得到结果，此结果为阳性结果。电渗作用（电渗是电场中溶液对于固体的相对移动，琼脂是酸性

2、物质，在碱性缓冲液中带负电，而与它接触的溶液带正电，因此液体向阴极移动，产生电渗）【材料】正常人血清兔抗人血清，等电点：8.00.05UpH8.6巴比妥钠—盐酸缓冲液、生理盐水1%离子琼脂板用0.05U巴比妥钠—盐酸缓冲液配成打孔器、图样板、毛细吸管电泳仪，电泳槽【步骤】制离子琼脂板先用生理盐水50 ml加1.2 g琼脂隔水煮沸融化，再加50 ml pH8.6 0.05 mol/L巴比妥缓冲液继续隔水煮沸至澄清，取融化的琼脂3.5～4 ml，浇于载玻片上，待其冷却加样对应孔号加试剂放入电泳槽开启电泳仪调整电压为30V电流强度为6~8mA通电1h电泳完毕取出琼脂板观察实验结果打孔（孔径3mm,孔

3、距3mm）＋131111222＋－1号内加入抗人血清；2号加入人血清；3号加入生理盐水作对照抗原抗体【注意事项】1、浇板时，琼脂面要铺平。2、加样时不要起气泡，勿溢出琼脂孔。3、抗原、抗体的量应相接近，如抗原量过多，可造成假阴性结果，须通过稀释抗原加以解决。4、电泳时电压不宜过高或过低，过高可能会将琼脂拉断；过低时沉淀线出现时间会延长