[精品]对流免疫电泳+血型鉴定

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1、一.对流免疫电泳(1)实验原理带电的胶体颗粒町在电场屮移动，移动的方向与胶体颗粒所带的电荷冇关，抗原在PH8.6的缓冲液中带负电荷，故山阴极向阳极移动，抗体球蛋白的等电点为PH6-7,故在PH8.6的缓冲液中带负电荷少，M•分子较大，移动缓慢，同时因电渗作用，反向阴极移动，于是形成抗原与抗体相对移动的情况，在二者相遇的最适比例处产定口色沉淀。此种在双向免疫扩散的基础上加电泳的方法称为对■流免疫电泳。由于抗原、抗体在电场中做定向移动，限制了琼脂双向扩散时抗原、抗体朝各方向白由扩散，因而提窩了实验的敏感度，口沉淀线出现较快。可在1小时内观察结果，

2、故可作快速诊断。(2)材料1.抗体：卬胎蛋白(AFP)诊断血清2.抗原：甲胎蛋白3.0.05M巴比妥缓冲液(PH8.6)4.1.25%缓冲琼脂5.电泳仪一套6.玻片，打孔器，10ML微量加样器(3)操作步骤融化的缓冲液琼脂倒板I微量加样器加抗原，抗体J注意勿产生气泡电泳60minJ抗原接阴极，抗体接阳极观察结果(4)实验结果(用实验照片展示)（5）讨论仁血清蛋白在PH8.6条件下带负电荷，所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷，而II它的分子量又较人（为「球蛋白）。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作

3、用影响较大，也就是说点渗作用大于它本身的迁移率。所谓电渗作用是指在电场中溶液对于一个固定固体的相对移动。琼脂是一种酸性物质，在碱性缓冲液中进行电泳,它带有负电荷，而与琼脂相接触的水溶液就带正电荷，这样的液体便向负极移动。抗体分子就是随看带正电荷的液体向负极移动的。而一般的蛋白质（如血清抗原）也受电渗作用的影响，使泳动速度减慢，但它的电泳迁移率远远人丁•电渗作川。这样抗原体就达到了左向对流，在两者相遇且比例合适时便形成肉眼可见的沉淀线。2.影响结果的因素（1）抗原抗体的比例：抗原抗体比例适应时容易出现沉淀带，反Z不易发生。当抗体浓度恒定时，被检

4、血淸含甲胎蛋口浓度高时，作10倍、20倍或更高倍数稀释可以提高阳性率。随稀释度的增加，抗原抗体的比例发牛变化，沉淀线由靠近抗血清孔向逐步移向两孔屮间，并可出现不典型的沉淀线如弧形、八字须形、斜线形，这些也是阳性，应予注意。（2）组电泳缓冲液莫电泳结果以巴比妥钠一盐酸缓冲液灵敏度最高。巴比妥一巴比妥钠次之。Tris缓冲液更差。（3）电压与电流时电泳时间需要长些：电压电流增大时，电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形，电流过大抗原抗体蛋门易变性，干扰实验结果。一般选择每厘米10毫升，电泳时间改为1小时。二.血型鉴定（1）实验原理根据红细胞上冇或无A

5、抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正（血清试验）反（细胞试验）定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原，所谓反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗Bo抗B抗体抗A抗体抗AB抗体血型结杲凝集不凝集凝集B型不凝集凝集凝集A型凝集凝集凝集AB型不凝集不凝集不凝集0型(2)实验结果(用照片展示)