[精品]ABO血型鉴定

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1、ABO血型鉴定根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用己知抗一A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一A或/和抗一B。标本种类及收集要求1受检者血清.2EDTA2K抗凝血或未稍取血，受检者血液制成5%红细胞盐水悬液使用。3标本出现中度溶血者，为不合格标本，不能用于检测。仪器、试剂、校准品、质控品、以及其他所需物品离心机，显微镜。抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）：长春

2、博德生物技术有限责任公司产品注册号：国药准字S1096088k包装:抗A、抗B各1支/盒，塑料瓶，规格:10ml/支。储存要求：2°C〜8°C避光保存，主要成分：分泌抗人A型和抗人B型血型原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体。0.9/%的生理盐水：山东齐都药业有限公司。操作步骤:试管法1取洁净小试管（内径10mmX60mm）3支,分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A、抗一B和抗一A十B分型血清各1滴（约50ul）于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混和。2另取洁净小试管（内径10mmX60mm）3支，分

3、别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混和。3立即以1000r/min离心3min。4将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集（或溶血）现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。5观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。6凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±

4、镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围冇很多游离红细胞。MF混合凝集外观（mixedfield）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。・表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。玻片法1取清洁玻片1张（或口瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明抗・A、抗・B和抗・AIB,分别用滴管滴加抗・A、抗・B和抗-AIB分型血清1滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。2另取洁净玻片一张（或口瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。3将玻片（或白瓷板）不断

5、轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min,先以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应；再在低倍镜下观察结果。5、结果判定ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞抗・A抗・B抗・A十BA细胞B细胞0细胞+-+A-+--++B+--■■-0++・4-&：+++为凝集；■为不凝集。AB■--注意事项：1分型血清必须为批批检试剂，且在有效期内使用；质量性能符合要求。试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。试剂开封后有效期为一周。2试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除

6、却存在于血清屮的抗体及可溶性抗原。或使用合格的商品诊断红细胞。试剂红细胞有效期：自制的为15天，商品的为试剂有效期。试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。试剂开封后有效期为—周。2生理盐水启用后，有效期为二周。3所有试剂在开封或使用时，必须检查是否有变质；凡可疑者，必须更换新的试剂进行检测工作。5试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。6操作方法应按规定，一•般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。7按理IgM抗・A和抗・B与相应红细胞的反应温度以4°C为最强，但为了防止冷凝集现彖的干扰，一般仍在室温

7、（20—24°C）内进行试验，37CT1T使反应减弱。8离心吋间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。9观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝同以及缗钱状排列的区别。10判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。11对于可能存在不完全抗原的吋候，应在各反应方加入凝聚胺试剂，以检验不完全抗原的存在。12对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。135%红细胞悬液的配制：用生理盐水洗涤红细胞3次。根据下表进行红细胞悬液的配制悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴）2ml(40)0.8ml(16)操作性能概要正反定型结果不一致的原因：有技术性

8、问题或红细胞和血清木身的问题，常见者有以下几种：1分