做好血液涂片和正确染色

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1、做好血液涂片和正确染色，是血液细胞检验的重要步骤，涂片和染色效果的好坏直接关系着检验的结果，必须以认真负责的态度注意操作过程的每一个环节。（一）玻片的清洁1．一般清洗法（1）将玻片放入肥皂或洗衣粉水中煮沸20分钟。（2）用热水将肥皂和血膜等污物洗去，再用自来水反复冲洗，最后再用蒸馏水冲洗3～5次。必要时再置95％乙醇中浸泡1小时，然后擦干或烘干备用。新玻片常有游离碱质，因此应用清洁液或10％盐酸浸泡24小时，然后分别用自来水及蒸馏水彻底洗涤。2．油污载片清洗法（1）清洗液甲液　10g／L过锰酸钾水溶液乙液　25g／L草酸水溶液（2）清洗方法将用过的玻片投入甲液数小时，取出

2、后再投入乙液数小时，然后用自来水和蒸馏水冲洗干净后再置95％乙醇中，以毛巾擦干净即成。久用后甲液可出现泥沙样沉淀，乙液有乳白色沉淀，可用棉花滤去再用，如乙液褪色应重新配置。（二）血涂片制作取末梢血1滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接触血滴后稍停。血液即沿推片散开，将推片与载片保持30～45°角，向前平稳均匀推动推片，载片上便留下一层薄血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形。血膜干燥后，用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号（图14－2）。图14－2　推血片方式一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，

3、膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。涂片时，血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。太薄的血膜片50％的白细胞集中于边缘或尾部，不利于白细胞分类。如果血膜分布不匀，主要是推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁所致。（三）染色1．瑞氏染色法（Wrightstaining）本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞中的特异性颗粒着色较好，但对核的着色较差。（1）原理瑞氏染粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M＋代表美蓝，以E

4、－代表伊红，其反应式为：M＋Cl－＋Na＋E→ME↓＋NaCl美蓝　伊红伊红化美蓝（瑞士染料）将适量的ME溶解在甲醇中，即成为瑞氏染液。甲醇的作用可使ME溶解，解离为M＋和E－，这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。甲醇的另一个作用是有很强的脱水作用，可将细胞固定为一定形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，因此，

5、在血片上可以见到不同的着色。细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色，因此该物质又称为嗜酸性物质。如，红细胞中的血红蛋白，嗜酸性粒细胞胞浆中的颗粒为碱性物质，这些物质可与伊红结合染成红色。细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色，该物质又称嗜碱性物质，如：嗜碱性粒细胞中的颗粒为酸性物质可与碱性染料美蓝结合染成蓝色。细胞核主要由脱氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形式的核蛋白所组成，这种强碱性的物质与瑞氏染液中的酸性染料伊红结合成红色，但因为核蛋白中还有少量的弱酸性物质，它们又与染料中的碱性染料美蓝作用染成蓝色。但因含量太少，蓝色反应极弱，故核染色呈现紫红色。

6、幼稚红细胞的胞浆和细胞核的核仁中含有酸性物质，它们与染液中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色。当细胞含酸、碱性物质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成红蓝色或灰红色，即所谓多嗜性。当胞浆中的酸性物质消失时，只与染液中的伊红起作用，则染成红色，即所谓正色性。（2）试剂①瑞氏染液瑞氏染料（粉） 1．0g纯甲醇（AR级以上） 600．0ml将全部染料放入乳钵内，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少半小时），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒人洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。密

7、闭保存。②磷酸盐缓冲液（pH6．4～6．8）磷酸二氢钾（KH2PO4） 0．3g磷酸氢二钠（Na2HPO4） 0．2g蒸馏水 加至1000．0ml配好后用磷酸盐溶液校正pH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。（3）操作①用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。②用瑞氏染液3～5滴覆盖整个血膜，固定细胞0．5～1分钟。③滴加等量或稍多的缓冲液，用吸球将其与染液吹匀，或者摇动玻片染色5～10分钟。④慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后（或用滤纸吸干），即可镜检。2．姬姆萨染色法（Gie