人类染色体g显带标本的制备

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1、人类染色体G显带标本的制备原理常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理再以Giemsa染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T对，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。Giemsa染料是噻嗪--曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色

2、。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。试剂及器材试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5%NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理盐水。器材：37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头。实验步骤取胰酶25mg，溶解于盛有50ml0.85%生理盐水的染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2滴，混匀，以5%NaHCO3调节pH为6.6-7.0。实验步骤待胰酶液温度升至37℃后，将染色体标本片（37℃烘箱烤片）放入胰酶液中，并轻轻摆动，数秒（视

3、烤片时间而定）后取出，立即自来水冲洗。实验步骤染色：pH7.4磷酸盐缓冲液4.5mlGiemsa原液0.5ml染色8-10分钟。自来水冲洗，空气干燥，镜检。注意事项良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多，且染色体分散要好。染色体长度应能适应显带分析技术的要求。G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间之搭配。实验结果低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍镜及油镜下观察，可见23对染色体较为饱满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可显出深浅不同的G带横纹。人类染色体G带歌谣：一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰；六号像个小白脸，七盖八下九苗条，十号长臂近带好，十一低来十二高；十三

4、、四、五一二一；十六长臂缢痕大，十七长臂带脚镣，十八白头肚子饱；十九中间一点腰，二十头重脚飘飘；二十一好象黑葫芦瓢，二十二头上一点黑；X染色一担挑，Y染色长臂带黑脚。ThankYou!