急性白血病原代细胞tgf-βⅱ型受体同种型的发现及其临床意义

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1、急性白血病原代细胞TGF-βⅡ型受体同种型的发现及其临床意义作者：陈萍，陈元仲，吴勇，黄慧芳，李乃农【摘要】转化生长因子β（TGF-β）及其受体的基因突变已被证实在肿瘤形成中具有重要的作用，在许多肿瘤中都发现有TGF-βⅡ型受体（TβR-Ⅱ）表达异常或表达缺失。为了了解急性白血病患者TβR-Ⅱ基因是否存在异常，本研究应用大范围RT-PCR的方法分段扩增急性白血病原代细胞TβR-Ⅱ的编码序列，并结合序列测定技术，分别对6例急性白血病患者以及11例正常人TβR-Ⅱ的编码序列进行突变检测。全部患者经骨髓细胞形态检查符合FAB诊断标准且骨髓原始细胞≥90%。肝素抗凝骨髓4-5ml，分

2、离单个核细胞，用TRIZOL试剂提取总RNA，反转录后行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。回收目的片段，克隆到PGEM-T载体，进行序列的测定。结果显示：在检测的病人中有2例病人中存在TβR-Ⅱ的同种型，而此2例病人临床预后不良。结论：部分白血病病人存在TβR-Ⅱ的同种型，而且该同种型可能与预后有关。【关键词】急性白血病　　IdentificationoftheIsoforminTypeⅡReceptorof11TransformingGrowthFactor-betainPatientswithAcuteLeukemiaandItsClinicalSignifica

3、nceAbstractRecentresearchindicatesthatTGF-βandtypeⅡreceptor(TβR-Ⅱ)playanimportantroleinthepathogenesisoftumor.AhighfrequencyofabnormalitiesinTβR-Ⅱhasbeendemonstratedinvariouscancers.ToidentifythemutationofTβR-Ⅱinpatientswithacuteleukemia，thebonemarrowsamplesfrom6patientswithacuteleukemiaand

4、11normalindividualsascontrolweredetectedbylong-rangeRT-PCR.TodetectadeletioninsequenceoftheTβR-Ⅱgene，thePCRproductswereclonedtoTvectorandthensequenced.TheresultsshowedthattherewasexistanceoftheisoformofTβR-Ⅱin2casesoutof6patientswithacuteleukemia.Thesetwopatientshadmorepoorprognosisthanothe

5、rs.Inconclusion，therewastheisoformofTβR-Ⅱinpartialpatientswithacuteleukemia，andtheisoformmayberelatedwithprognosis.　　Keywordsacuteleukemia;TβR-Ⅱ;isoformreceptor　　TGF-β信号转导通路在调节多种细胞的增殖与分化、诱导细胞凋亡等方面具有重要的作用，有研究表明这一通路的紊乱可以导致多种肿瘤的发生［1］。TGF-β受体（TβR）有3种亚型即TβR-Ⅰ11、TβR-Ⅱ和TβR-Ⅲ，其中TβR-Ⅱ和TGF-β具有较高的亲和力，

6、在TGF-β介导的信号转导中起着重要的作用，在许多肿瘤如慢性淋巴细胞白血病、人类表皮T细胞淋巴瘤患者中［2-3］均观察到TβR-Ⅱ表达缺陷。目前对于急性白血病原代细胞是否存在TβR-Ⅱ缺陷未见报道。本研究通过应用大范围RT-PCR技术分段扩增急性白血病原代细胞TβR-Ⅱ的编码序列，进行序列的测定，结合收集的病人的临床资料，初步探讨TGF-βⅡ型受体（TβR-Ⅱ）在急性白血病发病机制中所起的作用。　　材料和方法　　研究对象　　实验组6例，男5例，女1例，平均年龄47±18.6岁（30-66岁），为2003年4月-2004年2月福建医科大学附属协和医院血液科住院或门诊白血病病人，

7、均为初治患者，其中急性淋巴细胞白血病2例（均为L2），急性非淋巴细胞白血病4例（M12例，M21例，M51例）按FAB分型诊断明确，其骨髓原始细胞≥90%。正常对照组11例，男9例，女2例，年龄28±7.2岁（21-35岁），均为健康供髓者。　　单个核细胞的制备11　　采集骨髓，以肝素（40U/ml）抗凝。加入37℃温浴的2%甲基纤维素(华美公司产品)至其终浓度为0.1%，混匀，于37℃、5%CO2培养箱中静置30分钟，吸取上层有核细胞层，铺于Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液上层（华美公司产品