微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬菜中6-苄基腺嘌呤

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1、微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬菜中6-苄基腺嘌呤作者：张洁王琳琳刘海燕李姗陈明岩王英华【关键词】提取高效液相色谱法测定蔬菜6-苄基腺嘌呤1引言　　6-苄基腺嘌呤（N6-Benzylaminopurine，6-BA）作为植物生长激素，不仅在植物栽培方面广泛应用，也可用于蔬菜、水果的防腐保鲜，市售蔬菜、水果中可能有少量残留。人体摄取过量6-BA会刺激皮肤黏膜，伤害食道和胃黏膜，出现恶心、呕吐的现象，因此GB2760-1996规定了食品中6-BA最高残留量为0.2mg/kg。至今我国尚未建立食品中6-BA残留量标准检测方法。微波辅

2、助提取法（MAE）以提取时间短、提取剂用量少、提取产率高等优点得到广泛的应用。本研究采用MAE提取，HPLC分离来检测蔬菜中6-BA的残留量。本方法具有检出限低、回收率高，提取时间短等优点，用于实际样品分析，结果满意。　　2实验部分　　2.1仪器与试剂Agilent-11003高效液相色谱仪（美国Agilent公司），配有紫外检测器；KQ-200VOE型超声波提取仪（中国昆山市超声仪器有限公司）；SC-3610离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)；WR-E型微波样品制备系统（北京美诚公司）；R201型旋转蒸发器（巩义市英峪予

3、华仪器有限公司）。6-苄基腺嘌呤标准品（含量≥99.0%，Fluka公司）；乙腈和甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）；冰乙酸（色谱纯）；酸化甲醇：100mL甲醇-水（7∶3，V/V）中加入冰乙酸50μL；实验用水为娃哈哈纯净水。　　2.2HPLC测定条件VenusilXBP-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm，美国Agela公司)；检测波长：270nm；流动相：甲醇-水-乙腈（55∶40∶5，V/V）；柱温：30℃；流速：0.8mL/min；进样量：20μL。　　2.3标准曲线绘制准确移取浓度为10.00mg/L6-

4、BA标准液0.125，0.25，1.00，1.50，2.00，2.50，7.50，10.00，12.50及15.00mL于25mL容量瓶中，用甲醇溶液定容。配制成浓度为0.05，0.10，0.40，0.60，0.80，1.00，3.00，4.00，5.00及6.00mg/L的标准系列，按上述HPLC条件测定，以峰面积（A）对浓度（c，mg/L）绘制标准曲线。　　2.4提取方法（１）MAE法准确称取10.00g绿豆芽样品于研钵中，捣碎，移至微波提取罐中，加入40.00mL酸化甲醇，温度为60℃时，高压（150kPa）MAE提取10

5、min，冷却高温提取液，以5000r/min离心15min，清液收集于503mL离心管中。（２）UE法准确称取10.00g绿豆芽样品于研钵中，捣碎，移至50.00mL离心管中，加入20.00mL酸化甲醇，UE提取15min，收集上层清液。再向剩余残渣中加入20.00mL提取剂重复上述步骤，合并两次提取液。（３）浓缩处理将MAE或UE提取液经旋转蒸发仪浓缩至10mL，用甲醇定容于25.00mL容量瓶中，经0.45μm滤膜过滤，进行HPLC分析。　　3结果与讨论　　3.1方法线性范围、精密度与检出限按标准曲线配制成浓度为0.05～8

6、0.00mg/L的标准系列并进行测试。结果表明，在0.050~80mg/L范围内，6-BA浓度（c，mg/L）与峰面积（A）呈良好的线性关系，其线性回归方程为A=101.03c+3.29，相关系数r=0.9999。对11份浓度为0.05mg/L的标准溶液进行测定，RSD为1.2%。以豆芽、豆苗为基质制备7份加入0.5mg/kg的加标样，以MAE法提取，以7份样品分析结果的标准偏差的３倍计算，方法的检出限为0.016mg/kg。　　3.2实际样品分析与回收率准确称取绿豆芽、黄豆芽、黑豆芽、豆苗及经过6-BA保鲜液处理的菜花和西兰花

7、各10.00g，MAE提取。另取上述样品，加入适量6-BA标准品溶液，捣碎样品，混匀，进行回收率实验。其回收率为92.8%~96.8%，相对标准偏差为1.1%~5.2%3