微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的vc含量

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1、现代化学实验与技术（仪器分析实验）微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量摘要本文通过微波辅助萃取法，快速提取柠檬、香橙和梨样品中的维生素C，采用高效液相色谱进行分析，PhenomenexC18色谱柱，3%乙腈—0.05mol·L-1KH2PO4水溶液（v/v）作流动相，流速为1mL/min，紫外光学检测器，检测波长为265nm。维生素C在质量浓度为20-100mg·L-1范围内有良好的线性关系，根据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。实验测得每100g柠檬、香橙和梨中含维生素C的量分别为44.573mg、51.194mg和0.85543

2、mg。本方法简便快捷，准确稳定，结果令人满意，可广泛应用于蔬果中Vc含量的检测。关键词微波辅助萃取高效液相色谱维生素C蔬果1.前言维生素C又称抗坏血酸,是维持人体正常生理代谢的一种重要化合物,人体纤维组织的胶原蛋白、骨与软骨的基质、血管的内皮以及其它非上皮性的粘合质等的形成均需维生素C的帮助,人体若严重缺乏会引起坏血病[1]。同时，由于Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在

3、50-300mg/100g。目前水果和蔬菜中维生素C测定的方法除了药典规定的碘量法[2]，还有比色法[3]、紫外分光光度法[4]、荧光法[5]等,但这些方法所需试剂多且操作繁琐,测定结果准确性也存在一定问题[6]。水果、蔬菜维生素C含量的测定依照国标[7]，采用2,6-二氯靛酚滴定法。根据维生素C的还原性，由样品溶液由蓝色变为粉红色来辨别其终点的到达。但此方法药品价格较高，而且许多蔬果含有花青素、叶绿素等有色物质，影响终点颜色的判断。近年来发展了用高效液相色谱法测定维生素C含量的方法，具有高效、快速、稳定、可靠等特点，并且灵敏度高，紫外检测器可达0.0

4、1ng，进样量在μL数量级。之前测定维C药片中的维C含量采用库仑滴定法，但在蔬果的维C含量测量中，由于其组分复杂，维生素C含量少，不能使用将该方法应用到蔬果的维C含量检测中。故本实验采用高效液相色谱进行分析，以Vc标准系列溶液的色10现代化学实验与技术（仪器分析实验）谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。1.实验部分1.1仪器与试剂1.1.1仪器高效液相色谱仪：LC-2010C（岛津香港有限公司）；微波萃取仪（上海新仪微波化学科技有限公司）；色谱柱：依利特或PhenomenexC18柱(250mm×4.6mm,I.D

5、.5μm)；平头进样器。色谱条件：流动相：3%的乙腈-0.05mol·L-1KH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；柱温30℃，紫外检测波长265nm；进样量10μL。1.1.2试剂乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；柠檬、香橙、梨样品。实验用水为超纯水。Vc标准溶液：快速准确称取0.025gVc，用1mol·L-1乙酸溶液溶解，定量转移至250mL容量瓶中，用1mol·L-1乙酸溶液定容，得到100mg·L-1标准溶液备用，现用现配。1.2实验方法（1）按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。（2）样品准备：准确称取切

6、碎的蔬果样品5.0g，以1mol·L-1乙酸50mL为萃取溶剂，微波功率设为600W，萃取时间为10min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次。萃取液过滤后用1mol·L-1乙酸溶液定容至50mL，制成供试品溶液。（3）定性分析：分别取10μL50mg/L的Vc标准溶液和供试品溶液，进行HPLC分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。（4）校准曲线绘制：分别配制5，20，50，80，100mg/L的Vc样品溶液，待液相色谱稳定后10现代化学实验与技术（仪器分析实验）进样分析，平行测定3次。以Vc色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。（5）定量分析：供试品

7、溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。记录其Vc的色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc的含量，结果以mg/100g表示。1.结果与讨论1.1标准曲线的绘制表1Vc标准曲线浓度与峰面积关系表（λ=265nm）浓度c/μg·mL-15205080100保留时间tR/min1.8141.8121.8101.8091.803峰面积A175241718807175064727642013392501以色谱峰面积对浓度作标准曲线，如图1：图1Vc溶液标准工作曲线相关系数R=0.99982线性方程：A=33908c+30962取浓度为5mg·L-1

8、的Vc标准溶液的色谱数值，做出其标准参考色谱图，如图2：10现代化学实验与技术（仪器分析实验）