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1、微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量摘要：本实验采用微波辅助萃取法快速萃取梨、柠檬和橙中的维生素C，采用高效液相色谱进行分析，以维C标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中维C的峰面积，由校准曲线计算其浓度。测得梨、柠檬和橙中的维生素C的含量分别为0.8555mg/100g、44.58mg/100g、51.19mg/100g。具有准确度高，操作简单，定量准确迅速的优点。关键词：微波辅助高效液相色谱维生素C1.引言维生素C,又称为抗坏血酸,是一种人体必需的水溶性维生素,也是一种天然抗氧化剂,是维持
2、机体正常生理功能的重要维生素之一,具有多种重要的生理功能,广泛参与机体氧化、还原等复杂代谢过程。维生素C是维持人体健康的一种重要物质,在人体内不能合成,主要从膳食中获取[1]。具有保持肌肤润滑、防止衰老、抗坏血酸等作用，是人体必需的主要维生素之一。维C在水果中主要以还原型(ASA)存在。能溶于水、乙醇和甲醇，而不溶于其他有机溶剂，具有酸味和还原性，有4种异构体，即L-抗坏血酸，D-抗坏血酸，L-异抗坏血酸，D-异抗坏血酸。天然抗坏血酸主要以L-抗坏血酸为主，其效力最高，也是通常所指的抗坏血酸。[2]分析维生素C的方法大致有以下几类:2,6-二氯靛酚滴定法,该法对无色或
3、浅色果蔬样品的测定容易把握,但对深色果蔬样品及产品的滴定终点较难掌握,往往影响测定结果；梯度比色法,对低维生素C含量和较熟悉样品的测定较为适宜,但对试样本身带有色素的样品测定则有一定的系统误差；荧光分析法,具有高灵敏度、高选择性,主要应用于临床代谢研究和病理检测；电位测定法,对植物样品维生素C的测定比较适合,但是其选择缓冲体系很重要；分光光度法,在一定的Vc浓度范围内,具有良好的线性关系。在近几年的Vc研究中使用较多的方法是高效液相色谱法。[3]本实验采用微波辅助萃取法快速萃取蔬果中的Vc，采用高效液相色谱进行分析，以Vc标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根
4、据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。[4]该方法具有较高的准确度、精密度和灵敏度,而且简便快速,更加适用于维生素C的测定。2.实验部分2.1仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪：LC-20A(岛津香港有限公司)；微波萃取仪(上海新仪微波化学科技有限12微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量公司)；色谱柱：依利特或PhenomenexC18柱(250mm×4.6mm，I.D.5μm)；平头进样器。试剂：乙腈(色谱纯)，冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；青椒、番石榴或西红柿等蔬果样品。实验用水为超纯水。Vc标准溶液：快速准确称取0.025gVc，用1m
5、ol/L乙酸溶液溶解，定量转移至250mL容量瓶中，用1mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L标准溶液备用，现用现配。色谱条件：流动相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液(v/v)；流速1mL/min；柱温30℃，紫外检测波长265nm；进样量10μL。2.2实验步骤(1)按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。(2)样品准备：准确称取切碎的蔬果样品5.0g，以1mol/L乙酸50mL为萃取溶剂，微波功率设为600W，萃取时间为10min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次。萃取液过滤后用1mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供试品溶液。(3)定
6、性分析：分别取10μL50mg/L的Vc标准溶液和供试品溶液，进HPLC分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。(4)校准曲线绘制：分别配制5，20，50，80，100mg/L的Vc样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析，平行测定3次。以Vc色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。(5)定量分析：供试品溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。平行测定2次，记录其Vc的色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc的含量，结果以mg/100g表示。(6)实验结束后，按要求清理好仪器。2.3注意事项(1)不同蔬果中Vc含量有较大差异，应注意保证样品溶液浓度在校准曲线范围内；
7、12微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量(2)校准曲线绘制和实际样品测定条件应严格一致；(3)应在老师指导下使用微波萃取仪和液相色谱仪。3．实验结果与讨论3.1实验原始数据记录表1.维C标准样品液相色谱数据CVc/mg·L-1保留时间t/min峰面积A51.814175241201.812718807501.8101750647801.80927642011001.8033392501表2.样品的相关数据样品保留时间t/min峰面积A质量m/g梨1.837455145.0169柠檬1.8097866474.9999橙1.808927226
