射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响

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1、射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响作者：刘建博，张玉芳，周宇，黄桂南，郭敏【摘要】　　【目的】观察射麻止喘汤对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响。【方法】选用SPF级SD大鼠分为哮喘组和正常对照组，哮喘组采用卵清蛋白（OVA）致敏并激发方法复制哮喘模型，造模成功后分别取各组支气管平滑肌进行细胞培养，倒置显微镜观察形态并经免疫荧光染色鉴定；给予大鼠灌胃高、中、低剂量的射麻止喘汤（剂量分别为64、32、6.4g·kg-1·d-1）制备含药血清；取2~5代ASMC分别给予射麻止喘汤高、中、低剂量含药血

2、清，蛋白激酶C（PKC）激活剂佛波醇12肉豆蔻酰13乙酸佛波酯（PMA，10nmol/L），PKC抑制剂马来酰亚胺甲磺酸盐（Ro318220，5μmol/L）干预；另设空白组（不给予任何药物血清干预）。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组ASMC增殖（D值）。【结果】免疫荧光染色鉴定结果显示所培养的细胞为平滑肌细胞。正常大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增高（P＜0.05），Ro318220组、射麻止喘汤各剂量组D值与空白组比较差异均无显著性意义（P＞0.05）。哮喘模型大鼠PMA组ASMC的D值较空

3、白组显著增加（P＜0.05），Ro318220组、射麻止喘汤各剂量组D值均较空白组显著降低（P＜0.05），但射麻止喘汤各剂量组与Ro31128220组比较差异无显著性意义（P＞0.05）。【结论】射麻止喘汤治疗支气管哮喘的作用可能与其能抑制ASMC增殖，影响哮喘的气道重塑过程有关。【关键词】射麻止喘汤/药理学；支气管哮喘/中药疗法；平滑肌细胞/病理学；细胞增殖；细胞培养；疾病模型，动物；大鼠　　Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofShemaZhichuanDecoction

4、（SZD）ontheproliferationoftheairwaysmoothmusclecells（ASMC）inasthmaticrats.MethodsSpecificpathogenfreeSDratswererandomizedintoasthmaticgroupandnormalcontrolgroup.Theasthmaticgroupweresensitizedwithintraperitonealinjectionofovalbumin（OVA）andchallengedwithintranasala

5、pplicationofOVA.Aftersuccessfulmodeling，bronchialsmoothmusclecellsweresampledforculturing，andtheirhistologicalfeatureswereobservedunderinvertmicroscope.Immunofluenscentassaywasusedforidentification.SerumcontainingSZDwaspreparedafteradministrationofSZDinthedosageso

6、f64，32and6.4g·kg-1·d-1totheratsbygastricgavage.ThesubcultureASMCofthe2ndto5thgenerationweretreatedhigh，moderateandlowdosageSZDcontainingserum，proteinkinaseC（PKC）activatorofphorbolmyristateacetate（PMA，10nmol/L）andPKCinhibitorofmaleimidemethanesulfonate（RO3182

7、20，5μ12mol/L），respectively.Ablankcontrolgroupwasalsosetup.TheproliferationofASMCwasdetectedbymethylthiazolyltetrazolium（MTT）assay.ResultsTheculturedcellswereidentifiedasbronchialsmoothmusclecellsbyimmunofluenscentassay.Forthenormalrats，theabsorptionvalueofASMCwash

8、igherinPMAgroupthanthatintheblankcontrolgroup（P<0.05），butabsorptionvalueinRO318220groupandSZDgroupsdidnotdifferfromthatintheblankcontrolgroup（P>