uplcms测定人血清中霉酚酸浓度的研究

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1、UPLCMS测定人血清中霉酚酸浓度的研究作者：胡岚岚，汤建林，周世文，刘智远，刘明，徐颖【摘要】　　目的建立一种快速、准确测定人血清中霉酚酸浓度的超高效液相色谱质谱（UPLCMS）测定方法。方法在血清中加入内标吲哚美辛，采用超高效液相色谱联合质谱的方法对血清中的霉酚酸进行分离测定。结果霉酚酸在0.05～100.00μg/mL的浓度范围内呈良好线性，r=0.9980，最低检测线为0.05μg/mL，方法回收率大于91.2%，日内、日间变异系数均小于5%。结论该方法准确、快速、灵敏，可用于霉酚酸的治疗药物监测、人体内药代动力学及生物等效性研

2、究。【关键词】霉酚酸；超高效液相色谱质谱；血清Abstract:ObjectiveToestablisharapidandaccuratemethodusingUPLCMSforquantificationofmycophenolicacidinhumanserum.MethodsIndometacinwasaddedtohumanserumsampleandmycophenolicacidinhumanserumwasdeterminedbyUPLCMS.ResultsThecalibrationcurvewaslinear(r=0.

3、9980)amongtheconcentrationrangeof0.05～100.00μg/mLandthelimitofthequantitativedetectionwas0.05μg/mL.Therecoveryofthemethodwashigherthan91.2%.Thecoefficientsofvariationfor10interdayandintradaywerebothlowerthan5%.ConclusionAsanaccurate,rapidandsensitivemethod,thisassaycanbeu

4、sedinthesupervisionofmycophenolicaciddrugandthestudyofpharmacokineticsandbioavailability.　　Keywords:mycophenolicacid;UPLCMS;serum马替麦考酚酯(mycophenolatemofetil)是霉酚酸(MPA)的2吗啉代乙酯，在体内脱脂化后形成具有免疫抑制活性的代谢物MPA，MPA选择性作用于T、B淋巴细胞，抑制其增殖。临床上用于预防急性器官排异反应，治疗同种异体肾移植后难治性排异反应。霉酚酸的血药浓度测定方法国内外已

5、有报道[17]，但以高效液相色谱分离、荧光检测居多，且多数样品处理过程繁琐，分析时间长。本文在参考文献的基础上采用超高效液相色谱质谱(UPLCMS)联用的方法，对血清中霉酚酸成功进行了分离测定。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂WatersAcquity型超高效液相色谱质谱系统（配QBA235型TQ检测器，K07UPA468M型SampleManager，K07UP8450M型BinaySolvent10Manager及Masslynxv4.1色谱管理软件）；色谱柱为AcquityUPLCBEHC18（2.1mm×50mm，1.7μ

6、m）；MC210S型电子天平（精度0.01mg）；AbbottDiagnostics，Division离心机；XH86多用途旋涡混合器，Millipore超纯水系统。对照品为霉酚酸对照药（批号：080816，含量99.3%），吲哚美辛内标物（含量大于等于99.3%，批号：100258200403），乙腈、甲醇均为色谱纯（Burdick＆Jackson公司）；甲酸（纯度大于或等于86.0%），实验用水均为Millipore超纯水。　　1.2方法　　1.2.1流动相的配制　　准确吸取1mL甲酸于1000mL容量瓶中，用超纯水定容，即得0.1

7、%的甲酸溶液，经0.45μm的水性滤膜过滤后于室温保存即可。　　1.2.2标准溶液的配制　　精密称取霉酚酸和吲哚美辛0.25g，用少量去离子水溶解后，再用去离子水稀释至50mL，配成浓度为5mg/mL的霉酚酸和吲哚美辛标准储备液，4℃10冰箱保存备用。取储备液用超纯水梯度稀释至浓度分别为100.00、80.00、60.00、40.00、20.00、10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05μg/mL的标准工作液，4℃冰箱保存备用。将吲哚美辛标准储备液稀释至浓度为100.00μg/mL的工作液，4℃冰箱保存备用。　　1.2.3

8、血清样品的处理　　精密移取空白血清0.5mL，加入内标储备液100μl，混匀后加入乙腈400μl，旋涡提取2min后，于11266r/min条件下离心10min，离