外周血muc1基因表达与食管癌微转移的关系

《外周血muc1基因表达与食管癌微转移的关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、外周血MUC1基因表达与食管癌微转移的关系作者：施舜缤，俞力超，胡嘉波，朱孝中，许文荣【关键词】食管癌;黏蛋白;微转移;逆转录聚合酶链反应　　1资料与方法1.1病例无转移组:选择2006年1月至2006年5月我院病理确诊为食管鳞癌而经B超、CT或术中探查未发现有远处转移的患者53例。转移组:同一时期病理确诊为食管鳞癌，又经B超、CT或术中探查明确发现有远处转移的患者10例。良性对照组:同一时期的食管炎7例,贲门失弛症2例,食管烧伤1例。1.2标本采集和处理　无转移组、对照组所有患者于采集标本前均未行任何针对肿瘤的治疗,采外周血(采集标本均需肝素抗凝),先抽出

2、1ml弃去,再留取5ml。红细胞裂解液裂解红细胞，分离有核细胞，液氮速冻后，-80℃保存备用。81.3方法　采用Trizol试剂提取细胞总RNA,所提RNA经1％琼脂糖电泳鉴定。以1μg为模板,以OligodT作引物,置于70℃温浴5min后,冰浴2min,再加入逆转录酶、dNTP等,在42℃温浴1.5h合成cDNA,94℃灭活逆转录酶及预变性5min，以cDNA为模板进行PCR扩增。MUC1基因引物设计序列如下［2,3］(外引物A和B,内引物C和D,产物分别为510bp，287bp)A:5′ATGCCAGTAGCACTCACCATAG3′；B:5′

3、CAGCCAAGGCAATGAGATAGAC3′;C:5′CGTCGTGGACATTGATGGTACC3′；D:5′GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA3′。β肌动蛋白作为内对照标准,引物序列E:5′TCATCACCATTGGCAATGAG3′；F:5′CACTGTGTTGGCGTACAGGT3′，产物为154bp。引物均由上海生工生物工程技术服务公司合成。巢式RTPCR扩增条件：第1次，94℃90s后,94℃15s，55℃30s，68℃45s循环35次；68℃终延伸5min，扩增产物510bp。第2次，94℃预变性90s，

4、94℃15s，55℃30s，72℃30s，循环30次；72℃终延伸2min。配制1.8%琼脂糖凝胶,产物电泳,经溴化乙啶(EB)显色得到特异性条带者为阳性检出。1.4统计学分析　应用SPSS11.0软件进行统计分析，采用χ2检验,8P<0.05为有差异有统计学意义。2结果2.1总RNA鉴定经过1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,18S和28S条带清晰可见，见图1。　　2.2各组之间阳性率比较　以β肌动蛋白的RTPCR扩增产物量为依据，调整巢式RTPCR模板量，标本MUC1表达结果见图2。良性对照组10例外周血中无MUC1mRNA阳性表达。无转移组MUC1mR

5、NA阳性检出率为39.6%(21/53),转移组MUC1mRNA阳性检出率90.0%(9/10),结果见表1，各组间差异有统计学意义(χ2=6.66,P<0.01)。表1患者术前外周血MUC1mRNA的检测结果（略）2.3无转移组阳性分布与病理分化程度的关系不同病理分化程度之间的MUC1mRNA阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。表2无转移组术前外周血中MUC18mRNA检测阳性分布与病理分化程度的关系（略）　　2.4食管癌患者阳性表达与国际TNM分期的关系MUC1mRNA阳性率随TNM分期升高而升高。但Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ期之间相比检

6、出率差异无统计学意义(P>0.05)；而Ⅳ期与Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ期相比阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。　　3讨论肿瘤微转移一般指恶性肿瘤细胞播散于淋巴结、骨髓、外周血及其他组织器官中，尚未形成转移性结节,无任何临床表现，常规方法难以发现和检测到的转移［4，5］。肿瘤临床转移一般都由微转移发展而来，对肿瘤微转移的检测是临床判断治疗效果、预示肿瘤复发的有效手段。有关食管癌的微转移研究起步较晚,一般局限于食管癌淋巴结的微转移方面［6，7］。外周血液的微转移研究较少，有证据表明食管癌患者外周血循环中也存在肿瘤细胞，提示食管癌患者并非中晚期才发

7、生血性转移［8，9］。早期发现肿瘤微转移对肿瘤的分期、复发、预后有重要的意义。表3食管癌患者术前外周血中MUC1mRNA检测阳性分布与国际TNM分期的关系（略）常规RTPCR技术一般1ml全血中含有100个肿瘤细胞以上时才可能被检测出。采用巢式RTPCR技术,即用两对引物进行两轮RT8PCR扩增,第2对引物序列在第1对引物扩增的RTPCR产物片段内,那么灵敏度可提高到1ml全血中含有1个肿瘤细胞就能被检测出［10］。我们应用巢式RTPCR技术检测了53例食管癌患者术前外周血标本,发现MUC1mRNA阳性率为39.6%(21/53)，已经发生临床转移

8、的食管癌患者阳性率为90.0%(9/10)；不同病理