欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:15198446
大小:27.50 KB
页数:4页
时间:2018-08-01
《2例福尔马林固定石蜡包埋组织的str检验》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、2例福尔马林固定石蜡包埋组织的STR检验作者:赵蕾,赵兴春,张庆霞,叶健,刘雅诚【关键词】福尔马林固定;石蜡包埋组织;MiniSTR 在法医实践中,会遇到对福尔马林固定石蜡包埋组织进行个体识别的案件。通常,从福尔马林固定石蜡包埋组织内提取DNA要经过一系列繁琐的程序,很容易导致DNA的丢失,并且此类检材极易发生降解,使得检验难度增加。 1案例 2例福尔马林石蜡包埋组织,分别为肝脏组织和绒毛组织。石蜡包埋的组织块距检验最长两年。要求进行DNA检验并与相应送检血样进行比对。 2检测方法与结果 2.1脱蜡与水化切片切取上述石蜡包埋组织
2、切片10.0μ4m厚10片,用手术刀片剔除组织周围多余石蜡,放入1.5ml的Eppendorf离心管中,加入1ml的二甲苯常温脱蜡,2h后吸弃管中液体,再次加入1ml二甲苯,常温脱蜡12h。分别以无水乙醇脱水2次,95%乙醇,75%乙醇,50%乙醇,25%乙醇脱水各1次,每一步骤间隔2h,每次加入1ml。最后用灭菌去离子水1ml清洗组织片1次。 2.2消化组织片加入PercollTM(AmershamBiosciences公司)分离液400μl,20mg/ml蛋白酶K30μl,10%SDS40μl,置37℃消化24h。其间追加20mg
3、/ml蛋白酶K60μl。 2.3DNA提取及纯化采用有机法提取DNA,将提取的DNA溶液全部置于MicroconTM100纯化柱(Millipore公司),2500rpm离心20min,再将纯化柱倒置一干净的1.5ml的Eppendorf管中,3500rpm离心10min,收集管内液体用于扩增。 2.4扩增分离扩增分别使用AB公司IdentiFilerTM试剂盒和MiniFilerTM试剂盒,反应体积均为25μl,模板量为2μl。扩增和检测分析使用9700型PCR扩增仪和3130XL型基因分析仪(AB公司)。 2.5结果石蜡包埋组
4、织用IdentiFilerTM试剂盒扩增荧光信号弱,平均荧光信号强度约<100rfu,其中检材1在D7S820,CSF1PO,D16S539,D2S1338,D18S51,FGA基因座没有得到基因分型;检材2则仅在D5S818得到基因分型;用MiniFilerTM试剂盒扩增,平均荧光信号强度4>400rfu,并且使用IdentiFilerTM试剂盒扩增时丢失的大片段等位基因能够成功得到DNA分型。但是在检材2中的D21S11基因座仍未能得到分型。MiniFilerTM试剂盒检测的DNA分型结果可以作为IdentiFilerT
5、M试剂盒的补充(见表1),与送检比对人员的血样DNA分型结果完全一致。表1石蜡样本DNA分型结果比对 3讨论 石蜡包埋组织的DNA提取,文献对脱蜡和水化切片的方法报道各不相同。本案例认为在石蜡包埋组织初始脱蜡过程中,用二甲苯脱蜡和不同浓度的乙醇水化切片非常关键[1]。若脱蜡不够充分,残余的石蜡会影响PCR的反应。使用不同浓度的乙醇可以充分去除二甲苯并且可以使水分进入细胞,利于消化过程的进行。在消化过程中加大了蛋白酶K的用量,并且每隔12h左右追加蛋白酶K1次,达到完全消化组织的目的,要求肉眼看不到组织块。 2例检材在使用Ident
6、iFilerTM试剂盒扩增时,扩增片段长度>250bp的基因座均没有得到分型结果。这是因为福尔马林固定石蜡包埋组织中DNA常常发生交联并降解为较小片段[2]。而使用MiniFilerTM试剂盒扩增时,由于在普通STR基础上使引物结合区更加靠近核心序列,其所包含的与IdentiFilerTM试剂盒中相同基因座的扩增片段范围缩短到74~245bp之间,从而可提高对此类降解检材DNA分型的成功率[3]。但在本报告中,1例福尔马林固定石蜡包埋组织在D21S11基因座没有得到分型,说明此例检材已降解小于该基因座的扩增片段。4 在日常检案中
7、,福尔马林固定石蜡包埋检材在常用的STR复合扩增试剂盒得不到完整的分型结果时,可以使用MiniFilerTM试剂盒进行检验,从而尽可能得到此类检材完整的STR分型结果。【参考文献】 1盖宝东,房学东,金仲田.提高石蜡包埋组织中提取DNA质量的实验研究.吉林大学学报(医学版),2003,29(1):115-118. 2田子强,刘俊峰,张少为,等.普通甲醛固定石蜡包埋组织提取方法的探讨.癌症,2004,23(3):342-345. 3周怀谷,张晨.全基因组扩增法用于低拷贝数DNA检测.法医学杂志,2006,22(1):43-47.4
此文档下载收益归作者所有