免疫失败儿童乙肝病毒s基因“a”抗原决定簇序列分析

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1、免疫失败儿童乙肝病毒S基因“a”抗原决定簇序列分析作者：虞勤,刘玉琴王永忠江剑华【摘要】目的：探讨乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败儿童病毒S基因“a”决定簇的变异情况。方法：对30例经乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败后血清表面抗原（HBsAg）阳性的儿童，采用聚合酶链反应方法（PCR）扩增其血清中HBVDNAS基因区，并对PCR产物直接标记测序。结果：30例HBsAg阳性儿童有28例血清HBVDNA阳性，其中有8例出现了S基因“a”决定簇的变异，变异率为28.6%，第126位的异亮氨酸（Ile）被苏氨酸（Thr）替代2例，第

2、134位苯丙氨酸（Phe）被异亮氨酸替代2例，第145位甘氨酸（Gly）被丙氨酸（Ala）替代4例。结论：乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败儿童中存在S基因“a”抗原决定簇变异。【关键词】乙型肝炎病毒；乙型肝炎疫苗；高效价乙肝免疫球蛋白；变异；基因　　［Abstract］Objective:ToinvestigatehepatitisBvirus(HBV)Sgene“a”determinantmutationinchildrenwhofailedtobeprotectedbyhepatitisBvaccineandhepatitisB9imm

3、uneglobulin.Methods：HBVDNASgenewasamplifiedbypolymerasechainreactionandsequenceddirectly.Results：Therewere28samplesforHBVDNApositiveinallchildrenwithHBsAgpositive,eightmutationsweredetected,themutationratewas28.6%;twostrainshowedIletoThratthe126codonofsurfaceantigen,twostrainsho

4、wedPhetoIleatthe134codon,andfourstrainsshowedGlytoAlaatthe145condonofsurfaceantigen.Conclusion：HBVSgene“a”determinantmutationexistedinHBVvaccinationandHepatitisBimmuneglobulinimmunefailurechildren.　　［Keywords］HepatitisBvirus;HepatitisBvaccine;HepatitisBimmuneglobulin;Sgenemuta

5、tion;gene乙型肝炎病毒的母婴传播是乙型肝炎病毒感染的重要途径之一。随着乙型肝炎疫苗和高效价乙肝免疫球蛋白的广泛应用，乙型肝炎的发病率已明显降低，但仍有部分儿童未能通过疫苗的主动免疫和高效价乙肝免疫球蛋白的被动免疫而得到保护。母亲体内病毒的高复制水平、宫内感染以及对疫苗的低反应性都可能影响疫苗的免疫效果。近年来有关研究显示S基因“a”决定簇的变异可能也是影响疫苗免疫效果的一个重要因素。为了解乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白免疫失败儿童S基因“a”9决定簇的变异情况，我们对接种过乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白的30例表面抗原阳性儿童“a”决定簇进行了

6、序列分析，现将结果报告如下。1材料与方法1.1对象入组儿童共30例，均为2005年1月至2006年1月在我院分娩。因其母乙肝血清学检查中HBsAg，HBeAg和HBcAb均为阳性，且HBVDNA阳性。孕期26周，31周，36周分别注射高效价乙肝免疫球蛋白200U，进行宫内母婴阻断。30例儿童在出生后的脐血HBVDNA均为阳性，出生后24h内及1月，3月，6月分别进行乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白进行预防免疫，经跟踪随访，出生后3岁体检HBsAg仍为阳性。其中，男16例，女14例，体检肝功能正常，无临床肝炎症状，血清分离后，-80°C冻存。　　1.2主

7、要仪器和试剂　　ABIPRISM310型核苷酸序列分析仪、PE9600型基因扩增仪、ABI5700型荧光定量PCR系统（美国ABI公司产品）。TaqDNA聚合酶、10mmol/LdNTP由上海生工公司提供，末端标记试剂BigDye为ABI公司产品，PCR产物纯化试剂盒为Qiagen公司产品。91.3引物由上海生工公司合成，P1：5′TCCCATCTCTCCACCTCTAA3′，P2:5′CATGAAGTTAAGGGAGTAGCC3′，P3:5′TCTAGACTCGTGGTGGACTT3′，P4:5′CCCCAATACCACATCATCCA。其

8、中P1/P2为外引物，P3/P4为内引物，引物浓度为25pmol/