11q23异常小儿急性淋巴细胞白血病细胞对trail的敏感性研究

《11q23异常小儿急性淋巴细胞白血病细胞对trail的敏感性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、11q23异常小儿急性淋巴细胞白血病细胞对TRAIL的敏感性研究【摘要】目的观察11q23异常小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞对肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)所介导的细胞毒的敏感性，并探讨其机制。方法以11q23异常ALL细胞株3株及原代细胞为研究对象，通过测定细胞表面TRAIL受体表达、TRAIL作用后细胞的存活率及凋亡，观察11q23异常ALL对TRAIL的敏感性。结果除KOCL33对TRAIL部分敏感外，KOCL69、KOPB26及原代细胞对TRAIL高度耐受。原代细胞及3个细胞株DR4均呈阴性，DR5在KOCL33呈强阳性，而在

2、其他细胞株呈阴性，原代细胞及3个细胞株均未表达DcR1及DcR2。结论11q23异常ALL细胞对TRAIL耐受的原因可能是细胞表面凋亡受体表达低下，并有可能是小儿11q23异常ALL迅速克隆扩增及GVL效应差的重要机制之一。【关键词】11q23;急性淋巴细胞白血病;凋亡诱导配体　40%~70%的婴幼儿急性白血病(infantacuteleukemia,IAL)存在11q23的染色体异常，包括易位、倒位、插入和缺失等，以t(4;11)(q21;q23)为最常见[1-2]。11q23异常白血病大多恶性程度高，对化疗不敏感，完全缓解率(completeremission

3、,CR)低，预后恶劣，且同种造血干细胞移植(allogeneichematopoieticstemcelltransplantation,11allo-SCT)无助于改善预后[3]。肿瘤的免疫监视受固有免疫和适应性细胞免疫调控，其中主要包括自然杀伤细胞(naturalkiller,NK)和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)[4-5]。研究表明，肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)相关的诱导凋亡配体(TNF-relatedapoptosis-inducingligand,TRAIL)在CTL和NK细胞介导

4、的抗肿瘤免疫中起重要作用[6-9]。本研究中我们探讨了11q23异常急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞对重组人可溶性TRAIL(rhsTRAIL)的敏感性，研究结果如下。　　1材料和方法　　1.1研究对象　　1.1.1细胞株及临床标本11q23异常ALL细胞株3株，其中KOCL33为t(11;19)、具有FLT3-D835突变[10];KOCL69为t(4;11);KOPB26为t(9;11)。Nalm1用作TRAIL敏感性对照，11q23异常ALL细胞株3株及幼仓鼠肾(BHK)细胞株来自日本山梨大学医学部小儿科。细胞株在37℃、5%CO2饱和湿度恒温培养箱条件下，

5、培养于含10%FCS的RPMI-1640培养液中。取对数生长期细胞用于实验。1例患者[5月龄女孩，t(4;11)]的骨髓经Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离出单个核细胞(原始细胞>95%)，RPMI1640培养基离心洗涤，悬于加有10%FCS的RPMI-1640培养基中。11　　1.2试剂及材料　　rhsTRAIL(KillerTRAIL)购于Alexis公司，Caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk、购于美国Sigma公司;Annexin-V-FITC购于BestBio(贝博，上海);DR4、DR5、DcR1及DcR2的单克隆抗体由顺天堂大学八

6、木田秀雄先生惠赠。　　1.3实验方法　　1.3.13H标记的胸腺嘧啶腺苷渗入法将RPMI-1640完全培养液调制成2.0×105细胞·mL-1细胞悬液，接种于24孔板，每孔液体量为1mL(最终浓度1×105细胞·mL-1)。对照孔加入新鲜培养液，TRAIL孔加入rhsTRAIL100ng·L-1作用24h，收集细胞，调制成1.0×106细胞·mL-1细胞悬液，接种于96孔平底培养板中，每孔100μL(最终浓度0.5×105细胞·mL-1)，并做三个平行样。培养板按指定方法孵育36h，并在培养的最后6h内给予3H标记的胸腺嘧啶脉冲(每孔1μCi)，然后收集到玻璃纤维

7、滤器上。用液体闪烁计数器计算整合入DNA的放射活性。通过添加或者不添加三倍稀释(最终浓度11、33、100ng·mL-1)rhsTRAIL培养基中的42h孵育结果，确定rhsTRAIL的效果。分别加入rhsTRAIL中和性抗体RIK-2(10μg·m-1)或z-VAD-fmk(20μM)LLnL(2.5μ11M)，阻断rhsTRAIL或caspases活性。rhsTRAIL的阻断率由以下公式算出：{1-[(处理孔的每分钟记数次数)/(未处理孔的每分钟记数次数)]}×100。　　1.3.2细胞存活率及和凋亡的检测将RPMI-1640完全培养液调制成2.0×105细胞

8、·mL-1