实时荧光定量rt - pcr 法检测膀胱移行细胞癌vegf的表达和意义

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1、实时荧光定量RT-PCR法检测膀胱移行细胞癌VEGF的表达和意义作者:安全意,张金刚,刘德斌,李成,马可为,姜丽萍【摘要】目的建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(real-timequantitative,RT-PCR)检测膀胱移行细胞癌(BTCC)组织VEGFmRNA表达的方法,并验证其与免疫组织化学检测VEGF蛋白表达的相关性。方法采用免疫组织化学SP法和实时荧光定量RT-PCR法分别从蛋白水平和mRNA水平检测了31例BTCC和15例正常膀胱黏膜组织中VEGF的表达。结果BTCC中VEGFm

2、RNA表达水平显著高于正常组,两组比较差异有显著性(P<0.05);BTCC中表达水平在高分化组与中低分化组之间、Tis-T1期与T2-T4期间的差异均有显著性(P<0.05)。VEGF的阳性表达率在BTCC组中为100%,显著高于正常组(P<0.05),在高分化组与中低分化组之间、Tis-T1期与T2-T4期间的差异均有显著性(P<0.05)。结论本研究所建立的用于检测人BTCC组织VEGFmRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量

3、检测方法,与免疫组化SP方法检测的VEGF蛋白表达具有良好相关性,可作为研究膀胱肿瘤的生物学行为和判断预后的参考指标。【关键词】膀胱癌;血管内皮生长因子;免疫组织化学;实时荧光定量RT-PCR11【Abstract】ObjectiveToestablishareal-timefluorescencequantitativeRT-PCRfordetectionofVEGFmRNAexpressioninbladdertransitionalcellcarcinoma(BTCC)andverifythe

4、correlationwithproteinexpressiondetectedbytheimmunohisochemistrymethod.MethodsTotalRNAwasextractedwithTrizolfromthetissuesandmRNAwastranscribedreverselyintocDNA.Thereal-timequan-titativeRT-PCRwasusedtodetecttheexpressionofVEGFmRNAin31inBTCCand15control

5、normalbladdermucosatissues.TheimmunohistochemistrySPmethodwasusedtoevaluatetheproteinexpressionofVEGF.ResultsTheexpressionofVEGFmRNAwassignificantlyhigherinBTCCtissuesthanthatinthenormalbladdermucosatissuetissues(P<0.05).BTCCexpressionlevelsinwell-d

6、ifferentiatedgroupandbetweengroupsofpoorlydifferentiated,Tis-T1withT2-T4perioddifferenceswerestatisticallysignificant(P<0.05).ConclusionReal-timefluorescencequantitativeRT-PCRusedtodetecttheexpressionofVEGFmRNAmightbeareliablemethodforearlydiagnosis

7、ofBTCC.TheexpressionofVEGFmRNAiscorrelatedwiththatoftheVEGFproteinsignificantly.Itcanbeusedtostudythebiologicalbehaviorofbladdercancerandjudgtheprognosis.11【Keywords】bladdercancer;vascularendothelialgrowthfactor;immunohistochemistry;real-timefluorescen

8、cequantitativeRT-PCR膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,其中膀胱移行细胞癌(bladdertransi-tionalcellcarcinoma,BTCC)占90%以上,且复发率极高,复发后肿瘤恶性度可增高、浸润、转移等行为有增强趋势。此过程与肿瘤细胞外基质的降解、新生血管的大量形成有密切关系。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是血管内皮细胞的特异性有丝分裂原,能促使肿瘤的血管生成、血管内物质

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